CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LA ACIL-COA CARBOXILASA DE CADENA LARGA DE Mycobacterium tuberculosis

GAGO, G.; DIACOVICH, L.; BAZET LYONNET, B; GRAMAJO, H.

Rosario

Congreso; VIII Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis; 2016

Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM), Asociación Argentina de Microbiología (AAM), Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis (SLAMTB), y la Sociedad Argentina de Microbiología General (SAMIGE)

CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LA ACIL-COA CARBOXILASA DE CADENA LARGA DE Mycobacterium tuberculosisIntroducción: Las acil-CoA carboxilasas (ACCasas) son enzimas que proveen carboxi-acil-CoAs, sustratos básicos para la biosíntesis de ácidos grasos y ácidos micólicos en el patógeno Mycobacterium tuberculosis. Dichas enzimas poseen tres dominios: biotin-carboxilasa, proteína transportadora de biotina y carboxil transferasa. En actinomicetes, estos dominios se encuentran en al menos dos cadenas polipeptídicas diferentes (subunidades). La composición de subunidades varía en cada complejo ACCasa. Al menos tres reacciones de carboxilación son necesarias para una normal biosíntesis de todos los lípidos presentes en M. tuberculosis. Por un lado, el acetil-CoA debe ser carboxilado por una acetil-CoA carboxilasa para formar malonil-CoA. Por otro, el propionil-CoA se debe carboxilar mediante una propionil-Coa carboxilasa. Por último, para la biosíntesis de ácidos micólicos es necesaria la corboxilación de un acil-CoA de cadena larga, la cual se lleva a cabo por una ACCasa específica de cadena larga. Hasta el momento, éste último complejo enzimático no ha sido caracterizado en su totalidad. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue el de caracterizar enzimáticamente la acil-CoA carboxilasa de cadena larga de M. tuberculosis.Materiales y métodos: La reacción enzimática in vitro se llevó a cabo mediante la incubación de las proteínas puras y los acil-CoAs de cadena larga a 30ºC durante 6 h. Luego, tanto los productos como los sustratos de la enzima fueron cuantificados mediante HPLC, y de ese modo se determinaron algunos parámetros cinéticos, como así también la especificidad de sustrato de este complejo enzimático. La composición química de los productos fue confirmada mediante espectrometría de masas.Resultados: El complejo ACCasa encargado de carboxilar acil-CoAs de cadena larga en M. tuberculosis está formado por cuatro subunidades: AccA3, AccD4, AccD5 y AccE5. La ausencia de cualquiera de estas cuatro subunidades da como resultado la pérdida total de la actividad enzimática. Fuimos capaces de caracterizar in vitro la actividad enzimática de dicho complejo frente al sustrato C20-CoA en términos de sus contantes cinéticas.Conclusiones: El complejo acil-CoA carboxilasa de cadena larga está formado por las subunidades AccA3-AccD4-AccD5-AccE5 siendo todas ellas esenciales para su actividad enzimática con sustratos acil-CoA largos. Teniendo en cuenta que las proteínas que forman dicho complejo son esenciales en M. tuberculosis, el mismo se postula como un buen blanco para el desarrollo de nuevas y más eficientes drogas contra la tuberculosis.