Desarrollo de un método molecular para la identificación de papilomavirus humanos con tropismo cutáneo

CHOUHY, DIEGO; GOROSITO, M; PICCIRILLI, GUSTAVO; ZIMMERMMAN, MARISA; CESARIOS, G; SANCHEZ, A; BERGERO, A; FERNANDEZ BUSSY, R; GIRI ADRIANA ANGELICA

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

Los papilomavirus humanos (HPV) son un grupo heterogéneo de virus con genoma a ADN sin envoltura que incluye más de 100 tipos distintos, el 75% de los cuales presenta tropismo por epitelios cutáneos. La contribución de los HPV cutaneotrópicos en el desarrollo de neoplasias de piel ha sido poco caracterizada. La epidemiología de las infecciones por HPV cutáneos es aún poco entendida, en parte por las dificultades técnicas en su detección que afectan la sensibilidad, especificidad, reproducibilidad y tipificación. Argentina es una zona de alto riesgo para el cáncer de piel. Sin embargo, no existen estudios sobre la incidencia de los HPV cutáneos en nuestra población, ni de su posible asociación o cooperación con neoplasias de piel. Nuestro objetivo fue desarrollar un instrumento basado en PCR colorimétrica para evaluar los tipos circulantes en nuestro país, su frecuencia y posible asociación con distintas neoplasias de la piel. Para ello optimizamos la técnica de “PCR de la gota colgante” con revelado colorimétrico para la detección de HPV. Dicha técnica se basa en 2 rondas de amplificación con el mismo par de cebadores sin la necesidad de abrir el tubo de reacción dado que la mezcla de la segunda etapa se encuentra colgando de la tapa. Posteriormente los productos de PCR son analizados por electroforesis en gel de agarosa y detección con sonda genérica en un ensayo del tipo ELISA. La identificación de los tipos involucrados se realizó por secuenciación directa de los productos amplificados. Se analizaron 161 muestras de 5 áreas distintas de la piel: hisopado de lesión, hisopado perilesional, hisopado de zonas sanas expuestas y no expuestas a UV y biopsia de la lesión. Las muestras fueron recolectadas de 39 pacientes que consultaron al Servicio de Dermatología por diversas dermatosis benignas (queratosis seborreica, queratosis actínica, verrugas virales, etc.) y malignas (carcinomas basocelulares y espinocelulares). La frecuencia de ADN de HPV fue del 68% (109/161), encontrándose más frecuentemente en las muestras obtenidas de piel sana expuesta a UV en comparación a la no expuesta a UV (89% vs 67%, respectivamente). Con respecto a las muestras provenientes de lesiones, se identificó más frecuentemente ADN de HPV en el área perilesional (96%) seguido del área superficial de la lesión (81%) y luego en la biopsia (50%). Se identificaron 53 tipos diferentes de HPV, 22 de los cuales están caracterizados completamente (se conoce todo su genoma), 16 parcialmente (se conoce sólo un fragmento de amplificación de PCR) y 15 tipos nuevos. Además se analizó la distribución de los tipos de HPV en los distintos sitios anatómicos, siendo el HPV-6 y HPV-20 los tipos más frecuentemente encontrados. En las áreas de piel normal expuestas a UV predominaron los tipos HPV-8 y HPV-20, en cambio en las áreas no expuestas predominó el HPV-21.