Rol fisiológico de MabR en la regulación de la biosíntesis de ácidos micólicos en Mycobacterium smegmatis

TSAI YI TING; GAGO GABRIELA; GRAMAJO HUGO; SALZMAN VALENTINA

Congreso; VIII SLAMTB Meeting. XXIII ALAM Meeting; 2016

Las micobacterias poseen dos sintasas de ácidos grasos (FAS-I y FAS-II) que actúan de manera concertada en la ruta de biosíntesis de los ácidos micólicos. En nuestro laboratorio hemos caracterizado el factor de transcripción MabR de M. tuberculosis, que regula la expresión del sistema FAS II mediante la unión a una repetición invertida presente en la región promotora del operón fasII, modulando de esta manera la biosíntesis de ácidos micólicos. Como objetivo de este trabajo nos propusimos descifrar el rol fisiológico de este regulador con el fin de poder comprender la compleja red regulatoria involucrada en el mantenimiento de la homeostasis lipídica en las micobacterias. Mediante el uso de una estrategia de recombinación homóloga en 2 pasos hemos logrado construir una cepa de M. smegmatis mutante condicional en mabR, denominada mabR cKD, en la cual la expresión del regulador se encuentra bajo el control del promotor PtetON, inducible por el agregado de anhidrotetraciclina (ATc). El análisis de esta mutante, la cual permite tener niveles sub-óptimos de MabR, nos permitió confirmar que este regulador es esencial para la viabilidad de M. smegmatis. Además, la cepa mabR cKD ha sido utilizada para analizar la expresión de los genes del operón fasII así como para analizar el impacto de la disminución de MabR sobre el perfil global de lípidos, con especial atención a su efecto en la biosíntesis de los ácidos micólicos. La caracterización de la cepa de M. smegmatis mabR cKD nos permitió demostrar que esta proteína modula positivamente la expresión del operón fasII in vivo. Se estudió además el efecto de distintas moléculas sobre la afinidad de MabR por su ADN blanco, encontrando que diferentes intermediarios en la síntesis de ácidos micólicos modulan la actividad de MabR. Teniendo en cuenta la esencialidad de MabR y su rol clave en la síntesis de ácidos micólicos, nuestros estudios abren la posibilidad de considerar este regulador transcripcional como un interesante blanco para el desarrollo de nuevos compuestos antimicobacterianos