IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
El regulador de estrés de envoltura CpxR es requerido para optimizar la expresión de la bomba de eflujo Salmonella-específica GesABC en condiciones de estrés metálico
Autor/es:
CERMINATI, S.; CHECA SK (PRESENTADOR)
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016
Institución organizadora:
Asociación Latinoamericana de Microbiología y Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Los complejos de eflujo tripartitos de la familia CBA son esenciales para eliminar una gran variedad de compuestos tóxicos desde la envoltura celular de bacterias Gram negativas hacia el medio externo contribuyendo fuertemente a restaurar la homeostasis luego de una condición de estrés. La expresión de estos complejos está altamente regulada y usualmente depende de varios factores transcripcionales que integran diferentes estímulos ambientales. El sistema de eflujo GesABC es uno de los cinco sistemas de esta familia con que cuenta Salmonella enterica, y el único que está presente únicamente en este patógeno, ya que ha sido adquirido por transferencia horizontal de genes junto con otrosdeterminantes esenciales para la detoxificación de iones de oro. Como el resto de los genes de este locus foráneo, la expresión de GesABC depende del sensor y regulador local GolS que activa la transcripción de los genes en respuesta al incremento en la concentración intracelular de oro solubilizado. En un estudio previo demostramos que la secuencia reconocida por GolS en el promotor de gesABC difiere sustancialmente de los operones de golTS o golB, las otras dos unidades transcripcionales controladas por este regulador, y de hecho, la activación de gesABC sólo ocurre a concentraciones intracelulares mayores de GolS y oro, o cuando la exposición al metal tóxico persiste. Con el fin de evidenciar si laexpresión de gesABC depende además de otros sistemas regulatorios, utilizamos inicialmente herramientas de bioinformática para identificar secuencias de unión de factores transcripcionales relacionados con la respuesta al estrés de envoltura en la región promotora de gesABC. Identificamos así una secuencia similar al consenso para la interacción con CpxR, el regulador del sistema de dos componentes CpxR/CpxA, que responde a señales que alteran la homeostasis del periplasma o la membrana interna y que controla la expresión de otros complejos CBA en numerosas bacterias. Esta secuencia está ubicada corriente arriba y adyacente al sitio de unión de GolS en el promotor. La efectiva regulaciónCpxR‐dependiente fue verificada mediante estudios in vivo, determinando la expresión de un reportero ges::lacZ en cepas carentes de CpxR, GolS o ambos reguladores, así como mediante estudios de interacción con el ADN in vitro. Además, utilizando mutagénesis sitio‐dirigida modificamos el sitio de unión de CpxR y analizamos su efecto sobre la transcripción de gesABC y la resistencia al metal. El conjunto de resultados nos permitió determinar que CpxR no es esencial para la expresión de GesABC pero sí para incrementar los niveles de expresión enpresencia de elevadas concentraciones de oro, contribuyendo así a contrarrestar los efectos tóxicos del metal y restaurar la homeostasis de la envoltura celular en estas condiciones de estrés.