El regulador RamA de Serratia marcescens es necesario para la resistencia a polimixina B y la supervivencia en células epiteliales

JAVIER FERNANDO MARISCOTTI; ELEONORA GARCÍA VÉSCOVI

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología 2016; 2016

Asociación Latinoamericana de Microbiología y Asociación Argentina de Microbiología

Introducción. El lipopolisacárido (LPS) lípido A es reconocido por el sistema inmune innato. Las bacterias Gram‐negativas modifican el LPS paraevadir al sistema inmune del huésped y para resistir la destrucción por los péptidos antimicrobianos. Serratia marcescens es una bacteriaentérica que puede actuar como patógeno oportunista en los huéspedes inmunocomprometidos. Esta bacteria patógena posee varios factoresde virulencia, incluyendo adhesinas, enzimas extracelulares y LPS. Recientemente se reportó que, en Klebsiella pneumoniae, el reguladortranscripcional RamA, funciona como un regulador alternativo de genes implicados en la biosíntesis del lípido A. Determinamos que, elaislamiento clínico de Serratia marcescens RM66262, posee un gen homólogo a ramA, y hallamos un posible sitio de reconocimiento para elregulador del sistema de dos componentes PhoP en la región promotora de ramA.Objetivo. Analizar la implicación del regulador RamA de S. marcescens RM66262 en la regulación de los genes de la biosíntesis del lípido A, suparticipación en la resistencia a polimixina B y la supervivencia en células epiteliales.Materiales y métodos. Se evaluaron los niveles expresión de los genes lpxO1 y lpxO2 mediante PCR semicuantitativa en la estirpe silvestre y enlos mutantes phoP, ramA o ramA phoP. Utilizando un plásmido reportero cuantificamos los niveles de transcripción del promotor ramA encondiciones de activación y represión del sistema PhoP/PhoQ. La susceptibilidad a polimixina B se determinó creciendo la cepa silvestre y losmutantes en LB suplementado con diferentes concentraciones de polimixina B. Se realizaron ensayos de protección a antibiótico para analizar lainvasión y proliferación intracelular en células epiteliales utilizando la estirpe silvestre y los mutantes en estudio.Resultados. Nuestros resultados muestran que PhoP está implicado en la regulación de la expresión de RamA y que ambos PhoP y RamAmodulan la expresión de los genes lpxO1 y lpxO2 necesarios para la modificación del LPS de Serratia marcescens. Determinamos que elregulador RamA es necesario para la resistencia a la polimixina B y para la supervivencia en células no fagocíticas.Conclusiones. Nosotros postulamos que, en S. marcescens, la expresión PhoP‐dependiente de RamA constituye un circuito regulador requeridopara la respuesta a los péptidos antimicrobianos y la supervivencia dentro de las células epiteliales.