IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
OXA-58 carbapenemase lipidation is essential for outer membrane vesicle recruitment in Acinetobacter baumannii
Autor/es:
BRAMBILLA L; LIMANSKY AS; MORAN BARRIO J; CAMERANESI MM; FABBRI C; VIALE AM
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Acinetobacter baumannii es un patógeno oportunista Gram-negativo responsable de una variedad de infecciones ligadas al cuidado de la salud. La mayoría de las cepas responsables de infecciones presentan fenotipos de multi-resistencia a antimicrobianos, siendo la emergencia de resistencia añadida a carbapenemes entre estas un problema acuciante en la actualidad. Los mecanismos de biogénesis y secreción de CHDL en A. baumannii han sido poco estudiados. En este trabajo caracterizamos la biogénesis de la CHDL OXA-58 proveniente de un aislamiento clínico de A. baumannii obtenido en el Hospital Provincial del Centeneraio, Rosario, cuyo gen (blaOXA-58) se localiza en un plásmido natural.El análisis de la secuencia de blaOXA-58 sugiere un posible destino tanto en el periplasma como asociada a la membrana externa (ME). En la región N-terminal de OXA-58 identificamos una secuencia lipoBOX característica de lipoproteínas asociadas a ME, incluyendo el residuo cisteína conservado. Generamos un gen blaOXA-58 mutado con un cambio cisteína por alanina (OXA-CA), y tanto el gen parental como el mutado fueron clonados en el vector pWH1266 y expresados en la cepa sensible A. baumannii ATCC 17978. La capacidad de OXA-58-parental (OXA-P) y mutada de conferir resistencia frente a carbapenemes se evaluó midiendo susceptibilidad a imipenem (IPM) de las células. Encontramos que OXA-P confiere a éstas resistencia a carbapenemes, pero que en presencia de OXA-CA dicho fenotipo es drásticamente reducido. Los niveles de acumulación de OXA-58 en células de A. baumannii se correlacionaron con el nivel de resistencia conferida. Asimismo, ensayos de fraccionamiento subcelular revelaron la presencia de OXA-P no solo en el espacio periplasmático, sino también asociada a vesículas de ME (VME). Por el contrario, OXA-CA sólo fue detectada en su forma soluble en el periplasma. Finalmente, ensayos de lipidación utilizando [3H]palmitato en ATCC 17978 produciendo OXA-P revelaron la incorporación del lípido a dicha proteína.Estas observaciones indican que la exportación de OXA-58 al periplasma como enzima soluble es capaz de conferir resistencia a carbapenemes a A. baumannii. Asimismo, que parte de esta CHDL es asociada a VME producidas por este patógeno difundiendo así al ambiente extracelular. Esto sugiere un escenario en el que la secreción de OXA-58 asociada a VME por A. baumannii puede conferir protección antimicrobiana de largo alcance, actuando asimismo como ?pantalla? contra la acción antimicrobiana a otros microbios sensibles acompañantes (por ejemplo, en infecciones polimicrobianas) proporcionando otro ejemplo de comportamiento altruista/cooperación entre patógenos.