IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INMUNODETECCIÓN DE UNA PROTEÍNA HOMÓLOGA A PSORIASINA HUMANA EN EXTRACTOS DE ESPERMATOZOIDES Y EN PLASMA SEMINAL PORCINOS
Autor/es:
TEIJEIRO JUAN MANUEL Y MARINI PATRICIA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; X congreso y XXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2008
Resumen:
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El oviducto es un órgano
dinámico que modula las funciones de las gametas. La interacción entre el
espermatozoide y el epitelio oviductal genera la formación de un reservorio
espermático, seleccionando espermatozoides con determinadas características. Sperm
Binding Glycoprotein (SBG) es una glicoproteína localizada en la
superficie apical del epitelio oviductal porcino e involucrada en la selección
negativa de espermatozoides en estado de capacitación. Esta glicoproteína
interacciona in vitro principalmente
con dos proteínas que hemos identificado previamente utilizando LC-MS/MS como homólogas
a psoriasina y dermcidina humanas. En este trabajo se informa la generación de
anticuerpos específicos contra psoriasina humana recombinante y la inmunodetección
de una proteína homóloga en extractos proteicos de espermatozoides. Para
generar dichos anticuerpos transferimos la secuencia que codifica para
psoriasina humana (clon gentilmente cedido por el Dr. Peder Madsen, Aarhus,
Dinamarca) al vector de expresión pGEX-2T. La expresión de la proteína
recombinante de fusión glutatione-S-transferasa-
psoriasina se realizó en la cepa Escherichia
coli DH5-α. Luego de su purificación por cromatografía de afinidad se
procedió a inocular conejos según el protocolo de inmunización de la Facultad de Ciencias Bioquímicas
y Farmacéuticas. Una vez confirmada la especificidad, los sueros de los conejos
inmunizados fueron utilizados para realizar western blot. Extractos de
proteínas de espermatozoides y plasma seminal de tres diferentes padrillos
(n=3) fueron enfrentados con sueros anti-psoriasina de conejos a una dilución
1:1000. Se detectaron bandas inmunoreactivas en extractos de proteínas de
espermatozoides y en plasma seminal con una masa molecular aparente de
aproximadamente 12 kDa en geles de poliacrilamida al 15%. Esto confirma la
presencia de una proteína homóloga a psoriasina humana en espermatozoide
porcino y establece que la misma se encuentra también presente en plasma
seminal. Este es el primer reporte de la presencia de una proteína homóloga a
psoriasina en cerdos y en espermatozoides y líquido seminal de cualquier
especie