IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INMUNODETECCIÓN DE UNA PROTEÍNA HOMÓLOGA A PSORIASINA HUMANA EN EXTRACTOS DE ESPERMATOZOIDES Y EN PLASMA SEMINAL PORCINOS
Autor/es:
TEIJEIRO JUAN MANUEL Y MARINI PATRICIA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; X congreso y XXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2008
Resumen:
<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> El oviducto es un órgano dinámico que modula las funciones de las gametas. La interacción entre el espermatozoide y el epitelio oviductal genera la formación de un reservorio espermático, seleccionando espermatozoides con determinadas características. Sperm Binding Glycoprotein (SBG) es una glicoproteína localizada en la superficie apical del epitelio oviductal porcino e involucrada en la selección negativa de espermatozoides en estado de capacitación. Esta glicoproteína interacciona in vitro principalmente con dos proteínas que hemos identificado previamente utilizando LC-MS/MS como homólogas a psoriasina y dermcidina humanas. En este trabajo se informa la generación de anticuerpos específicos contra psoriasina humana recombinante y la inmunodetección de una proteína homóloga en extractos proteicos de espermatozoides. Para generar dichos anticuerpos transferimos la secuencia que codifica para psoriasina humana (clon gentilmente cedido por el Dr. Peder Madsen, Aarhus, Dinamarca) al vector de expresión pGEX-2T. La expresión de la proteína recombinante de fusión glutatione-S-transferasa- psoriasina se realizó en la cepa Escherichia coli DH5-α. Luego de su purificación por cromatografía de afinidad se procedió a inocular conejos según el protocolo de inmunización de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Una vez confirmada la especificidad, los sueros de los conejos inmunizados fueron utilizados para realizar western blot. Extractos de proteínas de espermatozoides y plasma seminal de tres diferentes padrillos (n=3) fueron enfrentados con sueros anti-psoriasina de conejos a una dilución 1:1000. Se detectaron bandas inmunoreactivas en extractos de proteínas de espermatozoides y en plasma seminal con una masa molecular aparente de aproximadamente 12 kDa en geles de poliacrilamida al 15%. Esto confirma la presencia de una proteína homóloga a psoriasina humana en espermatozoide porcino y establece que la misma se encuentra también presente en plasma seminal. Este es el primer reporte de la presencia de una proteína homóloga a psoriasina en cerdos y en espermatozoides y líquido seminal de cualquier especie