Identificación de factores de virulencia de Candidatus Liberibacter asiaticus mediante el análisis funcional en Saccharomyces cerevisiae.

TORRES P.S.; DAVIA RUIZ R.M.; MOLINA M.C.; GARCIA L.; GMITTER F.; VOJNOV A. A; MARANO M.R. ; GADEA J.

San Miguel de Tucumán

Simposio; X Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO Argentina.; 2015

REDBIO Argentina

La enfermedad de Huanglonbing (HLB) es causada por Candidatus Liberibacter spp (Ca. L.). y representa una gran amenaza para el cultivo de cítricos a nivel mundial debido a que provoca un rápido decaimiento y reducción del tiempo de vida de las plantas infectadas. Recientemente se ha observado la dispersión de la enfermedad de manera preocupante en los cultivos del sur de Brasil y se ha transformado en un potencial grave problema para productores argentinos, sobre todo de la región tucumana y la Mesopotamia, donde existen grandes plantaciones de cítricos destinados a la exportación. Debido a que ya se ha detectado la presencia de Diaphorina citri, en insecto vector, en las provincias de Entre Ríos, Corrientes, Salta y Jujuy, lo cual implica un riesgo potencial para el establecimiento de la enfermedad, a pesar de no haberse encontrado hasta el momento poblaciones del vector infectados por Ca. L.. El mecanismo por el cual este patógeno es capaz de promover la enfermedad y bloquear o superar los mecanismos de defensa de la planta no es conocido. Hasta la fecha, se desconoce la función biológica de las proteínas putativas, candidatas de ser factores de virulencia de Ca. L. asiáticus, debido a la imposibilidad de manipular genéticamente a esta bacteria por su carácter de patógeno intracelular obligado. Identificar dichas proteínas efectoras o factores de virulencia, así como comprender su función molecular y sus dianas en la célula hospedadora es esencial para la comprensión del mecanismo del establecimiento de la enfermedad HLB. A fin de sortear estas limitaciones, realizamos la expresión heteróloga de proteínas de Ca L. para evaluar su toxicidad en a la levadura Saccharomyces cerevisiae. Utilizando un modelo de inhibición del crecimiento de levadura, pudimos identificar efectores de la bacteria que interfieran en procesos celulares conservados en eucariotas. Inicialmente seleccionamos 20 genes que fueron amplificados del genoma de Ca L. asiáticus, se clonaron mediante Gateway en el vector de expresión pAG de levadura, fusionados a un TAG de hemaglutinina en la región C-terminal y bajo el control de un promotor inducible por galactosa. De los 20 genes candidatos seleccionados, solo uno de ellos reduce el crecimiento de la levadura un 30% en la fase exponencial, en presencia de galactosa. Indicando que la expresión de esta proteína interfiere en algún proceso biológico conservado de la célula eucariótica.