IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
BÚSQUEDA DE NUEVAS PROTEÍNAS INVOLUCRADAS EN LA OXIDACIÓN DE MANGANESO (II)
Autor/es:
PIAZZA, A.; CIANCIO, L.; GOTTIG, N.; OTTADO, J.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; III Congreso Argentino de Microbiologia Agricola y Ambiental; 2015
Resumen:
Las bacterias oxidantes de Manganeso (Mn) son filogenéticamente diversasy generalmente se encuentran en ambientes versátiles tales como el suelo, lasaguas naturales y sedimentos. Hasta el momento se han identificado dos tipos deenzimas con capacidad de oxidar Mn (II): las enzimas llamadas Multicobreoxidasas (MCO), que son una familia de proteínas que unen cobre y que tienen lacapacidad de oxidar distintos sustratos, y las Hemo-peroxidasas de unión acalcio. Sin embargo, no se han realizado estudios exhaustivos para identificar proteínasinvolucradas en los procesos de biooxidación, transporte y metabolismo de estemetal. Asimismo, existen pocos estudios de los mecanismos molecularesutilizados en estos procesos por bacterias aisladas de zonas con altaconcentración de Mn.En estudiosprevios realizados en nuestro laboratorio se seleccionó y aisló una bacteriaoxidante de Mn a partir de muestras ambientales, identificada como Pseudomonas resinovorans. El género Pseudomonas representa un sistemamodelo, ideal para el estudio de la fisiología y mecanismo de oxidación de Mn(II), debido a la facilidad de crecimiento y manipulación en condicionesestándar de laboratorio. En este trabajo se propone identificar nuevas proteínasinvolucradas en la oxidación de Mn (II), a partir del estudio de dichoaislamiento bacteriano.Para ello, serealizaron ensayos que permiten verificar actividad oxidante de Mn por PAGEnativo, ?ensayo de oxidación in gel? in situ. Se sembró la fracción deproteínas solubles intracelulares y solubles secretadas de la cepa de interésen geles de poliacrilamida 8%. Luego de la electroforesis, los geles fueronincubados por 30 minutos en un buffer (pH 7.5; 0.5% Triton X-100,10% [v/v]glicerol) y posteriormente en HEPES 10 mM (pH 7.5; 200 μM MnCl2 yCuSO4). El proceso de oxidación pudo seguirse visualmente mediantela aparición de bandas de óxidos de Mn de color marrón en el gel, las cualesaparecen usualmente luego de 24 h de incubación a 37°C. Posteriormente, paraverificar que las bandas observadas efectivamente correspondían a óxidos de Mn,se incubó el gel con Leucoberbelina, un compuesto que en presencia de Mn (III oIV) se oxida, produciendo un color azul.Se pudo detectar unabanda de oxidación de Mn en la fracción de proteínas solubles secretadas de labacteria analizada. El análisis posterior de la banda por nanoHPLC-ESI-Orbitrappermitirá la identificación de la proteína responsable de la oxidación.Por otro lado, se pusoa punto un ensayo colorimétrico con leucoberbelina, que permite cuantificar lacapacidad de oxidación de Mn (II).Este trabajocontribuirá al entendimiento del proceso de oxidación de Mn (II) en Pseudomonas resinovorans y además esteestudio podrá extrapolarse a otro tipo debacterias.