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Las High Mobility Group B (HMGB) constituyen una familia de proteínas que participan en diversas funciones nucleares, tales como la reparación y replicación del ADN y la modificación de la estructura de la cromatina. TcHMGB presenta dos dominios de unión al ADN denominados ?HMG-box? y un dominio único N-terminal característico de tripanosomas. En nuestro laboratorio estamos interesados en dilucidar la importancia de la proteína TcHMGB en T. cruzi. Para llevar a cabo estudios funcionales de esta proteína en el parásito se clonó la secuencia codificante de TcHMGB en el vector pTcINDEX-GW. En su extremo C-terminal se adicionaron dos epítopes de hemaglutinina (HA) en tándem para su posterior inmunolocalización en el parásito. Luego se transfectaron epimastigotes de la cepa Dm28c/pLEW13 con dicha construcción y se seleccionaron. Mediante Western Blot se determinó la expresión de la proteína TcHMGB(HA)2 utilizando anticuerpos anti-TcHMGB y anti-HA. Por otro lado se midió mediante la técnica de PCR tiempo real los niveles de transcriptos de la proteína recombinante. Se usó GAPDH como control interno para normalizar las cantidades de expresión. Para verificar la localización de expresión en el parásito se realizaron inmunofluorescencias utilizando anti cuerpos anti-HMGB y anti-HA donde se confirmó la localización nuclear de la proteína. Para determinar el efecto de la sobreexpresión de TcHMGB en el parásito se realizaron curvas de crecimiento donde se observó una disminución del crecimiento a partir del sexto día, usando la cepa que porta el vector vacío como control. Se midió el porcentaje de infectividad que posee la cepa sobreexpresante con respecto a aquella que porta el plásmido vacío con el uso de células Vero. También se midió el porcentaje de metaciclogénesis in vitro. Construcciones de versiones truncadas de la proteína TcHMGB están siendo construidas para evaluar la importancia del dominio N terminal de la proteína en el parásito T cruzi.