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Los Papillomavirus humanos (HPV) son un grupo heterogéneo constituido por virus no envueltos con genoma a ADN doble hebra circular con tropismo por epitelios mucosos y cutáneos. Está firmemente establecido que la infección por HPV mucosotrópicos es el principal factor en el desarrollo del cáncer cervical y que la detección de los tipos oncogénicos de HPV mejoraría el diagnóstico precoz. En los países en vías de desarrollo como Argentina, la introducción de técnicas moleculares de detección de HPV como metodología adjunta a los programas de cribado citológicos se ha retrasado debido a la falta de métodos diagnósticos estandarizados, de alta eficiencia y bajo costo. En este estudio reportamos el desarrollo y la evaluación del L1HPVPCR, un método basado en PCR con revelado colorimétrico para la detección y tipificación de los cinco tipos oncogénicos más prevalentes. Para ello, se analizaron distintos valores de corte para la detección con sondas genérica y específicas utilizando la reproducibilidad y las curvas ROC (receiver operating characteristic) para asegurar la mejor sensibilidad y efectividad clínica. Utilizamos el L1HPVPCR para estimar la prevalencia de HPV en un grupo de mujeres a riesgo de desarrollar cáncer cervical en la ciudad de Rosario, donde no se han reportado previamente datos epidemiológicos al respecto. Además, analizamos la utilidad clínica del L1HPVPCR respecto del papanicolaou utilizando como "gold standard" un diagnóstico combinado de citología, colposcopía e histología. Otro aspecto que será discutido en esta presentación es el análisis de la integración del ADN de HPV en el genoma celular como marcador de progresión maligna. El genoma de los HPV de alto riesgo oncogénico, tales como el HPV-16, es mantenido en forma episomal en lesiones de bajo grado, mientras que en lesiones de alto grado se encuentra principalmente integrado al genoma celular. La integración viral ocurre por la ruptura de la región E1/E2 del genoma viral. E2 codifica para una proteína que regula la transcripción viral y su pérdida permite la expresión de los oncogenes virales, E6 y E7, y el inicio de la transformación celular. Con el objetivo de analizar el estado físico del ADN de HPV-16 como marcador de progresión maligna, desarrollamos y optimizamos un ensayo basado en la co-amplificación de E2 y E6 por PCR y la detección colorimétrica de ambos amplicones. La medida del cociente E2/E6 a partir de las absorbancias resultantes luego de la detección colorimétrica de cada amplicón permitire determinar si el ADN viral se encuentra en forma episomal (E2/E6 = 1), integrado (E2/E6 = 0) o en formas mixtas (0 << E2/E6 << 1). Se optimizó esta PCR multiplex con el plásmido pW12 que contiene el genoma completo de HPV-16, obteniéndose una sensibilidad analítica de 100 copias/reacción para cada fragmento génico. Posteriormente evaluamos el valor pronóstico del cociente E2/E6 en la progresión maligna en muestras secuenciales de pacientes infectadas con HPV-16 y que presentaban lesiones cervicales de distinto grado de severidad. Este ensayo permitirá correlacionar el grado de severidad de las lesiones con el nivel de integración viral y su contribución en los procesos de progresión maligna asociados a HPV.