IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de la ferredoxina-NADP(H) reductasa de Xanthomonas axonopodis pv. citri en la respuesta a estrés oxidativo
Autor/es:
TONDO, M. LAURA; DELPRATO, M. LAURA; OTTADO, JORGELINA; ORELLANO, ELENA G.
Lugar:
Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; IV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Microbiología General (SAMIGE).; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Microbiología General
Resumen:
Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) es una bacteria Gram (-), aerobia obligada, que infecta plantas de cítricos produciendo una enfermedad severa conocida como cancrosis de los cítricos o cancrosis Asiática. La infección bacteriana de una planta elicita la activación de una serie de mecanismos de defensa. Una de las respuestas más tempranas, la explosión oxidativa, consiste en la rápida acumulación de especies reactivas del oxígeno (EROs), lo que constituye una barrera para el desarrollo del patógeno. La capacidad de la bacteria invasora de sobrevivir y proliferar dentro de la planta requiere de mecanismos enzimáticos y no enzimáticos para detoxificar rápidamente las EROs y reparar el daño oxidativo de sus componentes celulares. Una de las enzimas involucradas en la respuesta a estrés oxidativo en bacterias es la ferredoxina-NADP(H) reductasa (Fpr), la cual media reacciones redox reversibles entre NADP(H) y transportadores electrónicos de un electrón, tales como ferredoxina y flavodoxina. La actividad Fpr se cree que modula la homeostasis de NADP(H) en condiciones de estrés. El objetivo de este trabajo es caracterizar la enzima Fpr de Xac y evaluar su participación en la respuesta a estrés oxidativo. El gen fpr de Xac fue amplificado por PCR a partir de ADN genómico de dicha bacteria y clonado en el vector pET28. La proteína recombinante fue expresada y purificada mediante cromatografía de afinidad en columna de Ni-NTA. Las propiedades espectrales y los parámetros cinéticos para el sustrato NADPH de la enzima purificada fueron similares a los informados para otras reductasas bacterianas. La expresión del gen fpr en Xac fue estudiada mediante RT-PCR y Western blot tanto en condiciones control como en presencia de agentes generadores de anión superóxido, tales como metil viológeno (MV) y dimetoxinaftoquinona. Los resultados obtenidos indican que el gen fpr se expresa en Xac en condiciones normales de crecimiento y es inducido bajo condiciones de estrés oxidativo. Por otra parte, la funcionalidad de la Fpr de Xac fue estudiada mediante complementación de una cepa de Escherichia coli fpr-, la cual presenta una mayor sensibilidad al MV. Los ensayos de inhibición del crecimiento en placas conteniendo gradientes de MV indican que la enzima de Xac es capaz de sustituir a su homólogo de E. coli en la respuesta a estrés oxidativo, brindando protección frente al agente oxidante. En conjunto estos resultados permiten sugerir la participación de la Fpr de Xac en la respuesta a estrés oxidativo en esta bacteria.