Dinámica y caracterización de los sitios de unión a heparina en la membrana del espermatozoide porcino

DORA DAPINO; FERNANDO CANE; PATRICIA ESTELA MARINI; MARCELO O CABADA

Facultad de Ciencias veterinarias, UNR, Casilad, Santa Fe

Congreso; Jornadas de Divulgación Técnico-científicas de la Facultad de ciencias veterinarias de la UNR; 2007

Facultad de Ciencias veterinarias, UNR,

Se denomina capacitación al conjunto de cambios que experimentan los espermatozoides de mamífero luego de su residencia en el tracto femenino durante cierto tiempo y que les dan la capacidad de fecundar al ovocito. Se han identificado una gran variedad de dichos cambios en el espermatozoide durante su incubación bajo condiciones capacitantes y la mayoría de ellos parece relacionarse con modificaciones en la arquitectura de la superficie celular en respuesta a componentes del medio (2). En trabajos anteriores observamos un aumento de los valores de capacitación en espermatozoides porcinos incubados en el medio de capacitación denominado TALP, al suplementarlos con heparina, compuesto perteneciente al grupo de los glicosaminoglucanos sulfatados presentes en las secreciones del oviducto femenino (1). Con el objeto de localizar topográficamente los sitios de unión de la heparina a los espermatozoides durante la capacitación se utilizó inmunofluorescencia indirecta (3) incubando en TALP durante 120 min espermatozoides de 5 verracos adultos y de fecundidad probada, tomando alícuotas en distintos tiempos (0, 60 y 120 min). Cada alícuota fue incubada con heparina biotinilada y posteriormente con streptavidina-FITC. Una cuarta alícuota fue incubada además, con heparina sin biotinilar. La capacitación para cada tiempo de incubación, se estimó mediante la técnica de ionóforo de calcio A23187, que sólo permite reaccionar a los espermatozoides totalmente capacitados (4). Se observaron 2 patrones de tinción con FITC, (A) fluorescencia en región postacrosomal y (B) fluorescencia en región acrosomal, observándose una disminución de (A) y un aumento de (B) a lo largo del proceso de incubación (figura 1). En la muestra en donde se adicionó heparina sin biotinilar no se observó fluorescencia alguna. Se determinó mediante ANOVA, que los valores de reacción acrosómica luego de la adición del ionóforo no difieren significativamente del número de espermatozoides que muestran patrón B en cada tiempo de incubación con heparina biotinilada (p>0.05). Estos resultados indican, por un lado, que la heparina se une en forma específica y competitiva a la membrana del espermatozoide de cerdo, y que los receptores de heparina probablemente experimentan una redistribución en la membrana durante el proceso de capacitación. Ambos hechos podrían ser de utilidad en el desarrollo de una técnica de tinción para capacitación y el estudio del rol específico de los glicosaminoglucanos del tipo heparina en este proceso.