Estrategia para la producción de controles internos competitivos estables para la detección de virus con genoma a ARN mediante RT-PCR

PEREZ, G. R.; VILLANOVA, V.; TABORDA, MIGUEL A.; REGGIARDO, V.; TANNO, H; RIVADENEIRA, E.; GARDIOL, DANIELA; GIRI ADRIANA ANGELICA

Paraná

Congreso; I Congreso Nacional de SIDA; 2007

Sociedad Argentina Interdisciplinaria de SIDA

El diagnóstico molecular basado en RT-PCR para la detección de virus con genoma a ARN se ve a menudo condicionado por la falta de controles internos estables lo cual puede conducir a resultados falsos negativos. En este trabajo se describe una estrategia para la producción de controles internos competitivos (CIC) estables. El CIC es un derivado del fago Qß (rQß) en el cual fueron insertados los cebadores KY78/80 usados ampliamente para la detección del ARN del Virus de la Hepatitis C (VHC). rQß resultó resistente a ARNasas, estable a 4°C por 452 días en medio SM y por 125 días despues de liofilización y reconstitución. Su utilidad y funcionalidad fueron analizadas en un contexto clínico: el CIC fue agregado a muestras VHC-positivas, seguido de extracción de ARN y análisis con el CIC-VHC RT-PCR, un ensayo que combina RT-PCR, hibridización líquida con sondas específicas no radioactivas y detección colorimétrica. No hubo influencia del CIC en la detección cualitativa de VHC independientemente de la carga viral de las muestras.La estrategia planteada resultó versátil, de bajo costo y puede ser adaptada para la detección cualitativa o cuantitativa de otros virus con genoma a ARN tal como el VIH. Además el CIC desarrollado es un reactivo esencial para el dosaje de VHC con fines diagnósticos y/o para el tamizaje molecular en bancos de sangre.