Análisis Filogenético de Fotorreceptores de luz azul en Xanthomonas citri subsp. citri y su rol en la virulencia

MOYANO, L.; DAURELIO, L.D.; MACHINANDIARENA, F.; KRAISELBURD, I.; CARRAU, A.; MOREIRA, L.; ORELLANO, E.G.

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

Sociedad de Biología de Rosario (SBR)

Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) es una bacteria Gram negativa responsable de la cancrosis de los cítricos, una enfermedad que provoca grandes pérdidas comerciales en el mundo. Xcc es un patógeno de tipo hemibiotrófico que ingresa al tejido vegetal a través de estomas o heridas y coloniza el apoplasto produciendo la formación de cancros. El genoma de Xcc contiene cuatro genes que codifican para fotorreceptores putativos: un fitocromo, una proteína con dominio LOV (Light, Oxygen and Voltage) y dos proteínas tipo BLUF (Blue Light sensing Using FAD) (BLUF1 y BLUF2). Los receptores tipo BLUF son en su mayoría proteínas pequeñas las cuales utilizan flavina adenina dinucleótido (FAD) como cromóforo. Estas proteínas, adaptadas a la oscuridad exhiben características espectrales de una flavina oxidada, con dos máximos de absorbancia típicos a 365 y 445 nm. El objetivo general del presente trabajo es realizar el análisis in silico de las proteínas BLUF1 y BLUF2, y caracterizar la mutante BLUF2 (Δbluf2) durante la interacción con plantas hospedadoras de naranjo. Con la finalidad de conocer la identidad y composición aminoacídica de dichas proteínas se realizó un apilamiento utilizando el programa Clustal W. Además se evaluó la presencia de estos genes dentro de islas genómicas con el programa Island Viewer. Con el objetivo de conocer la historia evolutiva de los dominios BLUF pertenecientes a la familia Xanthomonadaceae, se generaron árboles filogenéticos empleando los métodos de Neighbor-Joining (NJ) y de Máxima parsimonia (MP). Por último se construyó la mutante Δbluf2 y se inocularon hojas de naranjo con cultivos ajustados a 105UFC/ml. De acuerdo con los resultados obtenidos de los análisis in silico podemos observar que ambas proteínas presentan los aminoácidos claves para la percepción de la luz, como así también los residuos que conforman el entorno del cromóforo. Se pudo determinar que ambos genes se encuentran en putativas islas de transferencia horizontal. Con la construcción de los árboles filogenéticos pudimos observar el agrupamiento de dichos dominios en los diferentes géneros. Mediante la construcción de la mutante Δbluf2 hemos podido demostrar la funcionalidad de dicho fotorreceptor en los procesos de virulencia, ya que su eliminación produce cambios significativos de fenotipo en infecciones de hojas de naranjo respecto de la cepa salvaje. Estos resultados sugieren la participación de la luz en los procesos de patogénesis, cuya señal sería captada y traducida por medio de las proteínas BLUF.