Identificación de heterocomplejos proteicos en la membrana externa del patógeno Gram-negativo Acinetobacter baumannii

RELLING, VERÓNICA M; MUSSI, MARÍA ALEJANDRA; LIMANSKY, ADRIANA S; VIALE, ALEJANDRO M

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología General. Sociedad Argentina de Microbiología General (SAMIGE); 2007

SAMIGE

Acinetobacter baumannii (A. baumannii) es un importante patógeno oportunista, reconocido por su capacidad de desarrollar rápidamente resistencia a nuevos antimicrobianos, de especial relevancia en ambientes nosocomiales. Nosotros demostramos previamente que la resistencia de cepas clínicas multiresistentes de A. baumannii a carbapenemes, b-latámico de última generación, está asociada con la desaparición de una proteína de membrana externa (Omp) denominada CarO [Mussi et al. (2005) Antimicrob. Agents Chemother 49, 1432-1440]. Encontramos además que CarO permite la permeación a través de la membrana externa (ME) de aminoácidos básicos resultando esencial para el ingreso de L-ornitina. La mayoria de las Omp involucradas en el ingreso de nutrientes de bajo peso molecular se encuentran en la ME en forma de homo-oligómeros, los cuales son generalmente estables al tratamiento con SDS a temperaturas moderadas y por lo tanto pueden ser identificados mediante SDS-PAGE. En este trabajo estudiamos la estructura de CarO en la ME de cepas clínicas de A. baumannii sensibles y resistentes a imipenem mediante geles bidimensionales SDS-PAGE. La primera dimensión permitió separar los complejos proteicos estables al SDS en función de su tamaño molecular, y la segunda dimensión disociarlos e identificar las proteínas que los conformaban. Se utilizó inmunodetección para evidenciar la presencia de CarO en los complejos detectados, así como MALDI-TOF para la identificación precisa de otras proteínas en los mismos. Nuestros estudios indicaron que CarO está asociada en la ME a Omp40, proteína perteneciente a la superfamilia OmpA y de función aun poco conocida.  En cepas de A. baumannii resistentes a imipenem que carecen de CarO, Omp40 se encuentra en la ME únicamente en forma de monómeros. Concluímos entonces que CarO forma heterocomplejos con Omp40 en la ME de A. baumannii. La función de los mismos está siendo analizada en el laboratorio.