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El desarrollo embrionario animal presenta patrones evolutivamente conservados de expresión génica. Los cuádruplex de guanina (G4) son estructuras secundarias estables de ADN o ARN simple hebra asociadas al control transcripcional y post-transcripcional de la expresión génica. El objetivo de este trabajo es identificar G4 involucrados en la regulación de la expresión de genes, conservados entre vertebrados y requeridos para el desarrollo embrionario. Se realizó una búsqueda in silico de secuencias con potencial de formar G4 (PG4) en las regiones promotoras (-1000 pb del sitio de inicio de transcripción) conservados entre los genomas de humano, ratón y pez cebra. Esta búsqueda arrojó un total de 104 genes, de los cuales 23 estaban relacionados a términos de ontología génica (GO) del desarrollo. Entre ellos, se seleccionaron tres PG4 teniendo en cuenta la conservación posicional y de orientación dentro de los promotores de las tres especies, la formación de G4 in vitro determinada por ensayos espectroscópicos de fluorescencia con Tioflavina T y la topología de hebra revelada por Dicroísmo Circular. Los G4 seleccionados estaban presentes en las regiones promotoras de los genes noggin 3 (nog3), collagen type II alpha 1 (col2a1) y frizzled class receptor 5 (fzd5). El efecto de los G4 sobre la transcripción de estos genes se estudió por transfección de una línea celular de fibroblastos humanos (MRC-5) con construcciones de los G4 de los genes humanos insertados en ambas orientaciones corriente arriba de un promotor constitutivo controlando al gen reportero luciferasa en el vector pGL3-promoter. Los resultados indican que los G4 ubicados en la hebra molde (-) reducen la transcripción del reportero mientras que los ubicados en la hebra codificante (+) no tienen efecto. Por otra parte, se realizaron ensayos de microinyección de oligonucleótidos antisentido para los G4 de los mismos genes de pez cebra, observándose una reducción en la transcripción medida por RT-qPCR. El análisis morfológico de los embriones microinyectados mostró que para nog3 se observaron alteraciones de los cartílagos craneofaciales, mientras que para col2a1a se observó una disminución de la longitud de las larvas. Los resultados obtenidos indican que existen G4 conservados entre vertebrados con función reguladora en el desarrollo embrionario.