Análisis de la fosforilación como señal de localización subcelular de CNBP durante la embriogénesis de zebrafish

VERÓNICA A. LOMBARDO; NORA B. CALCATERRA

Oro Verde, Entre Ríos, Argentina

Workshop; II Workshop de Microscopía de Fluorescencia 3D; 2007

Laboratorio de Microscopía - Facultad de Ingeniería - Universidad Nacional de Entre Ríos.

La proteína celular de unión a ácidos nucleícos (CNBP) es una proteína esencial para el normal desarrollo de estructuras craneofaciales en embriones de ratón (Chen et al.,2003), pollo (Abe et al.,2006) y pez (Weiner et al., enviado). CNBP presenta un alto grado de conservación de secuencia, presentando siete nudillos de zinc del tipo CCHC, una caja RGG y una señal de localización nuclear. En anfibios y peces, CNBP presenta una localización dual durante la embriogénesis, produciéndose una translocación del citoplasma al núcleo que comienza durante el estadio de gastrula tardía - inicio de período de segmentación (Armas et al.,2002; Armas et al.,2004). CNBP es fosforilada en el residuo Ser158 por una proteína quinasa dependiente de cAMP (PKA) de manera diferencial durante el desarrollo embrionario de zebrafish (Lombardo et al., 2007). Ambos eventos, translocación y fosforilación, concuerdan temporalmente. En el presente trabajo analizamos si la fosforilación es la modificación post-traduccional involucrada en la localización subcelular de CNBP. Para ello se construyeron proteínas de fusión a EGFP de CNBP salvaje y mutantes puntuales que reemplazan al residuo fosfo-aceptor Ser158 por Ala ó Asp. Este último simularía el efecto de carga negativa aportado por el fosfato. De ser este efecto el resultado de la fosforilación, podríamos analizar la consecuencia de una "fosforilación constitutiva". Los mRNA que codifican para las diferentes proteínas de fusión serán transcriptos in vitro y microinyectados en embriones de zebrafish. La localización subcelular será analizada utilizando un microscopio de fluorescencia confocal.