Estudio de proteínas de superficie ancladas covalentemente a la pared celular de Listeria monocytogenes

JAVIER FERNANDO MARISCOTTI; M. GRACIELA PUCCIARELLI; FRANCISCO GARCÍA-DEL PORTILLO

La Falda

Jornada; XIX Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2013

Sociedad de Biología de Córdoba

En bacterias patógenas Gram‐positivas como Listeria monocytogenes, las proteínas de superficie cumplen importantes funciones como adherencia, invasión, e interacción con el hospedador o el medioambiente. Dentro de las diferentes clases de proteínas de superficie conocidas, existe un grupo de ellas que son ancladas covalentemente al peptidoglicano mediante reacciones de transpeptidación catalizadas por enzimas denominadas ?sortasas". Estas enzimas reconocen motivos conservados en el extremo C‐terminal de la proteína sustrato. Estudios de proteómica realizados en el laboratorio revelaron que Lmo2185 y Lmo2186, dos proteínas de superficie de L. monocytogenes, son ancladas al peptidoglicano por la sortasa‐B (SrtB). Curiosamente, Lmo2185 presenta un único motivo NAKTN, mientras que Lmo2186 contiene dos posibles motivos NKVTN y NPKSS de reconocimiento para la SrtB. Con el objetivo de identificar el motivo que reconoce SrtB de sus dos proteínas sustrato de L. monocytogenes, construimos quimeras conteniendo el extremo C‐terminal de Lmo2185 y Lmo2186, cuyo comportamiento se analizó en la estirpe silvestre y en una estirpe deficiente en SrtB. Los resultados obtenidos indican que SrtB reconoce el motivo NAKTN de la proteína Lmo2185 y el segundo motivo NPKSS de la proteína Lmo2186. Asimismo, el estudio de quimeras conteniendo cambios puntuales en el motivo NPKSS de Lmo2186 sugiere que la prolina (P) en posición +2 juega un papel más importante que la lisina (K) en posición +3 en el reconocimiento de la proteína por SrtB. La enzima sortasa‐A (SrtA) ancla covalentemente 41 proteínas con motivo LPXTG al peptidoglicano de L. monocytogenes, algunas de estas proteínas son exclusivas de cepas patógenas de Listeria. En la actualidad solo cuatro de estas proteínas LPXTG de L. monocytogenes se han caracterizado a nivel bioquímico y funcional. Nosotros nos planteamos estudiar dos de estas proteínas (Lmo1413 y Lmo2085) ausentes en cepas no patógenas de Listeria. La falta de estas dos proteínas, Lmo1413 y Lmo2085, no altera la adhesión o invasión bacteriana en cultivos de células eucariotas. Sin embargo, la expresión heteróloga de Lmo1413 desencadena la entrada de la especie no invasiva L. innocua en células no fagocíticas, un efecto no observado con Lmo2085. Los ensayos in vitro, revelaron que mediante sus dominios MucBP Lmo1413 se une a la mucina. Por lo tanto, probablemente Lmo1413 promueve la interacción de L. monocytogenes con componentes de la matriz extracelular y de esta manera, facilita la entrada de la bacteria.