CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Trypanosoma cruzi adaptó su metabolismo y sus requerimientos nutricionales a la vida en el interior de sus hospedadores. Es así que muchos nutrientes esenciales no son sintetizados por el parásito sino tomados desde el entorno. Este es el caso del hemo, grupo prostético de muchas hemoproteínas esenciales como las que participan en la cadena de transporte de electrones mitocondrial (en citocromos) y otras enzimas como la peroxidasa. Nosotros estamos interesados en elucidar el tráfico de hemo hacia la mitocondria y su conversión a hemo A, cofactor únicamente encontrado en la citocromo c oxidasa (CcO). En nuestro laboratorio hemos identificado las secuencias en T. cruzi que codifican para las enzimas involucradas en la biosíntesis de hemo A, TcCox10 (hemo O sintasa) y TcCox15 (hemo A sintasa), y la función de las mismas fue caracterizada en S. cerevisiae. Con el objetivo de evaluar la esencialidad de esta vía, nos propusimos expresar en el parásito genes que codifiquen para mutantes no funcionales de estas proteínas. Basándose en alineamientos de las secuencias de las proteínas con las de otras especies, se identificaron residuos aminoacídicos conservados y esenciales para la actividad de las mismas. Se construyeron las mutantes por mutagénesis sitio dirigida y la actividad de las proteínas fue ensayada por estudios de complementación en S. cerevisiae. Mediante estos ensayos se comprobó que las mismas no son funcionales y mediante la técnica de Western blot se corroboró su expresión. Para la expresión en T. cruzi, se clonaron los genes en el vector inducible por tetraciclina pTcIndex y se realizaron los ensayos de inducción en epimastigotes. Los resultados obtenidos, hasta el momento para TcCox15, mostrarían una disminución del crecimiento de epimastigotes cuando se induce la expresión de las mutantes (efecto dominante negativo). Estos resultados nos permitieron concluir que la actividad de TcCox15 (o el metabolito producido) es esencial para este estadio de T. cruzi.