IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Cómo simplificar la caracterización de carbapenemasas en el laboratorio microbiológico clínico?
Autor/es:
SPALDING, T.; MARCHIARO, P.; CERA, G.; VILA, A.; VIALE, A.; ADRIANA SARA LIMANSKY
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Congreso SADEBAC 2006; 2006
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La resistencia adquirida a carbapenemes constituye una problemática emergente para diversos grupos bacterianos. En particular, las metalo-ß-lactamasas (MBLs) presentan elevado impacto, por su amplio perfil de sustratos, la carencia de inhibidores de uso clínico y su elevada diseminación. Por tanto, resulta esencial implementar ensayos que permitan distinguirlas de las restantes carbapenemasas. Bajo este objetivo general, decidimos simplificar el Ensayo Microbiológico que emplea EDTA como inhibidor e Imipenem como sustrato (EMEI) desarrollado en nuestro laboratorio. Para ello, optimizamos la técnica de preparación de extractos bacterianos que este método utiliza.  Así, evaluamos diferentes métodos de disrupción de células y diferentes condiciones, incluyendo: (i) sonicación, como metodología de referencia, (ii) disrupción mediante cambios sucesivos de temperatura, por congelamiento/descongelamiento (C/D), o freezado/ desfreezado (F/D) y (iii) ruptura empleando diferentes partículas, como perlas de vidrio o zirconio/sílica. Se utilizaron 16 cepas productoras de carbapenemasas, crecidas en medios líquidos o sólidos y diferentes tiempos de agitación para las rupturas con partículas. Se analizaron en forma comparativa las actividades enzimáticas de los extractos celulares provenientes de los diferentes ensayos de disrupción, en los ensayos microbiológicos. Resultaron concordantes a los obtenidos mediante sonicación los extractos provenientes de la ruptura empleando: perlas de vidrio o zirconio/sílica, ya sea desde medios líquidos como sólidos y agitación de 3 min; de F/D 4 veces sucesivas o C/D 2 veces, a partir de medios líquidos; o de F/D 10 veces a partir de medios sólidos. Así, la posibilidad de emplear extractos celulares obtenidos por métodos simples, rápidos y económicos facilita el empleo del EMEI para la caracterización apropiada de carbapenemasas.