CarO, una proteína de membrana externa vinculada con la resistencia a carbapenemes, forma oligómeros en la membrana externa de Acinetobacter baumannii.

RELLING, V.; MUSSI, M.; ADRIANA SARA LIMANSKY; AUDISIO, A.

Buenos Aires

Congreso; 3er. Congreso Sociedad Argentina de Microbiología General; 2006

(SAMIGE)

Durante los últimos veinte años las infecciones hospitalarias producidas por bacterias Gram-negativas multirresistentes se han incrementado considerablemente hasta convertirse en un problema significativo. Acinetobacter baumannii (A. baumannii) es un diplococo Gram-negativo reconocido en la actualidad como un importante patógeno nosocomial, asociado a infecciones de alta morbi-mortalidad como neumonía, bacteremia e infecciones de la piel y del tracto urinario. La aparición de cepas resistentes a antibióticos b-lactámicos de última generación como los carbapenemes complica seriamente la terapéutica. Es por esto que el conocimiento y caracterización de los mecanismos de resistencia exhibidos por estas bacterias resultan necesarios. Nosotros hemos demostrado que la resistencia a carbapenemes en aislamientos clínicos de A. baumannii está asociada con la desaparición de una proteína de membrana externa (PME), a la que denominamos CarO relacionada con el influjo de carbapenemes. Determinamos que la ausencia de CarO en aislamientos resistentes a carbapenemes se debe a la disrupción de su gen codificante por elementos de inserción.  Sin embargo, análisis de las PME de variantes resistentes mediante SDS-PAGE e inmunodetección, así como identificación mediante MALDI-TOF indicó la existencia de variantes de CarO con elevado porcentaje de identidad con la proteína presente en cepas sensibles. Postulamos entonces que dichas variantes podrían presentar diferencias en la especificidad  de CarO hacia carbapenemes u otras alteraciones funcionales. Las porinas de ME de bacterias Gram- negativas forman oligómeros estables incluso en presencia de detergentes como SDS. Resultó entonces de interés estudiar  la estructura cuaternaria de CarO en la ME de A. baumannii y su posible influencia en la capacidad de internalizar distintos compuestos. A tal fin se estudió el estado oligomérico de CarO en cepas sensibles y resistentes a carbapenemes que presentaban las distintas variantes mencionadas. Se obtuvieron las PME de estas cepas y se analizaron en geles bidimensionales SDS-PAGE. La primera dimensión permite separar complejos proteicos estables en función de su tamaño molecular, y la segunda dimensión desnaturalizante permite identificar las proteínas que forman oligómeros. La presencia de CarO en los  complejos de ME se evidenció  mediante  inmunodetección. Nuestros resultados indican que las variantes de CarO presentes tanto en cepas sensibles como resistentes forman complejos en la ME de A. baumannii. Por lo tanto las mutaciones acumuladas en CarO de variantes resistentes a carbapenemes no resultaron en una desestabilización del estado oligomérico de esta proteína en la ME bacteriana.