Interferencia de virus oncogénicos con la polaridad celular: Rol de los dominios de interacción proteica PDZ

MARZIALI F, FACCIUTO F, BUGNON VALDANO M, CAVATORTA AL Y GARDIOL D.

Valle Hermoso

Jornada; XXXII Reunión Científica Anual de la SAV; 2012

SAV

Diversas proteínas conteniendo dominios de interacción proteica PDZ (PSD‐95, DLG 1, ZO‐1) participan en el mantenimiento de la polaridad celular, la formación de las uniones intercelulares y los mecanismos de transducción de señales. Alteraciones en la localización y en los niveles de expresión de dichas proteínas se observan en diversas  patologías, entre ellas el cáncer. Las oncoproteínas E6 derivadas de papilomavirus humanos (HPV) de alto riesgo, cuya infección se asocia con el desarrollo de cáncer cervical, interaccionan con proteínas PDZ a través de una región C‐terminal conservada, que constituye un sitio de unión consenso a tales dominios. Dicha interacción resulta en la deslocalización y/o degradación de las proteínas celulares, contribuyendo a la pérdida de la polaridad y concomitante carcinogénesis. El mantenimiento de la polaridad celular depende de la integridad de las uniones intercelulares, en especial de las uniones tight (UT).               Con el objetivo de profundizar el conocimiento de la interferencia de la proteína E6 de HPV con la estructura de las UT, hemos analizamos los niveles y distribución de componentes claves del complejo de polaridad celular Par, en particular, la proteína PDZ Par3. Mediante ensayos de transfección, inmunofluorescencia e inmunoprecipitación observamos que la expresión de E6 de HPV altera la localización de Par3 a través de una interacción directa, mediada por su sitio de unión a PDZ. La polaridad celular también requiere la correcta distribución de lípidos fosfoinositósidos (PIP) involucrados en los mecanismos de traducción de señales. La proteínas celulares PDZ presentes en las UT interaccionan con estos lípidos permitiendo su correcta distribución. Por ello, investigamos si la unión PDZ-E6 podría interferir con la localización y función de tales lípidos usando un biosensor fluorescente de PIP. La expresión de E6 induce una deslocalización de PIP, reduciendo su presencia en los bordes celulares, por un mecanismo dependiente de su capacidad de interaccionar con dominios PDZ. Además, mediante “ensayos de polaridad celular”, que se basan en cambios en la concentración de calcio en el medio de cultivo, observamos una marcada deficiencia en los mecanismos de polarización en células que expresan E6 de HPV y de manera PDZ-dependiente.               Por otro lado, el virus linfotrópico de células T humanas tipo 1 (HTLV-1) ha sido asociado al desarrollo de leucemia, y sus actividades oncogénicas residen, en parte, en la proteína viral Tax-1. Dicha proteína posee también un sitio de unión a proteínas PDZ y se ha reportado su interacción e interferencia con algunas proteínas de dicha familia. Actualmente estamos abocados al clonado de la proteína Tax-1 y posteriormente evaluaremos su interacción con proteínas del complejo de polaridad Par, complejo clave para la polarización de células T inducida por citoquinas.               El entendimiento de la participación, en mecanismos comunes de los procesos oncogénicos, de un sitio de interacción proteica presente en distintas oncoproteínas virales facilitaría la búsqueda de nuevos blancos útiles para el desarrollo de herramientas diagnósticas y terapéuticas.