Interacciones proteína-proteína en un complejo nuclear de Trypanosoma cruzi.

C RIBB PAMELA; TROCHINE ANDREA; SERRA ESTEBAN

Huerta Grande

Congreso; XXI Reunión Anual. Sociedad Argentina de Protozoología; 2006

SAP

En tripanosomátidos el control de la expresión génica no ocurre durante el inicio de la transcripción, como en la mayoría de los organismos, sino que es principalmente post-transcripcional. Debido a la ausencia de verdaderos reguladores transcripcionales, las interacciones entre factores basales, ARN Polimerasas (ARNPs), proteínas de la cromatina y el ADN adquieren particular importancia como posibles puntos de control de la expresión génica a nivel del inicio de la transcripción. En los últimos años se han identificado ortólogos de algunos de los factores basales en los genomas de TriTryp, mediante minería de datos y técnicas experimentales. En nuestro laboratorio se han amplificado cerca de veinte genes correspondientes a posibles factores basales implicados en la transcripción por ARNP II y III. Estas secuencias fueron clonadas en vectores pENTR del Sistema Gateway (Invitrogen) y luego transferidas mediante recombinación a diferentes vectores de destino. Con el objeto de construir un mapa de las interacciones proteína–proteína responsables de la formación del complejo de unión al promotor SL, se utilizó la técnica de doble híbrido. TcTBP demostró interaccionar más fuertemente con TcTFIIA2, TcSNAP50 y TcSNAP42. Por su parte, TcSNAP42, estaría conectada con las otras subunidades SNAP:TcSNAP26 y TcSNAP50 y con TcTFIIA2. TcTFIIB no presentó interacción con TcTBP como se esperaba, mientras que el factor relacionado TcBRF, que participaría en el complejode inicio dependiente de ARNPIII, sí demostró una fuerte interacción con TcTBP. Si bien la técnica de doble híbrido parece no ser lo suficientemente sensible como para detectar interacciones débiles o que requieran estabilización por un tercer factor, los resultados obtenidos permiten proner un modelo de la arquitectura del complejo.