Los dominios dsRBD de DCL1 de Arabidopsis thaliana

SUAREZ, IRINA; BURDISSO, PAULA; PALATNIK, JAVIER F.; RASIA, RODOLFO M.

Buenos Aires

Congreso; XL Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011

<!-- @page { margin: 0.79in } P { margin-bottom: 0.08in } --> <!-- @page { margin: 0.79in } P { margin-bottom: 0.08in } --> Los dominios de unión a ARN doble hebra de DCL1 de A. thaliana I.P. Suarez, P. Burdisso, J.F. Palatnik, R.M. Rasia Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR-CONICET) y Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas UNR, Rosario, Argentina, isuarez@ibr.gov.ar La biogénesis de pequeños ARNs es un proceso complejo que involucra ribonucleasas tipo III de la familia Dicer1. En A. thaliana una de estas enzimas, DCL1, realiza el procesamiento de miARN produciendo los dos cortes necesarios para escindir con precisión el miARN maduro de su precursor, pri-miRNA2. El reconocimiento del sustrato es llevado a cabo por los dominios de unión a ARN de la proteína. La proteína DCL1 se diferencia de las proteínas Dicer canónicas por la presencia de un segundo dominio de unión a ARN doble hebra en el dominio C-terminal (DCL1-dsRBD2)3. Para comprender el reconocimiento del ARN por DCL1 estudiamossus dos dominios de unión a ARN doble hebra (dsRBDs), localizados en la región C-terminal de la proteína. Produjimos varias construcciones diferentes sobre la región C-terminal de DCL1. De la construcción que expresa DCL1-dsRBD2 se obtiene una proteína bien plegada. Hemos asignado las resonancias del esqueleto de la proteína HN, Ha, N, C´, CA y CB y adquirimos datos de Acoplamientos Dipolares Residuales (RDC) en fase anisotropica C12E5/hexanol. Las restricciones orientacionales fueron usadas para calcular el plegamiento de la proteína, que presenta diferencias significativas en comparación con dsRBDs canónicos: una inserción en el loop beta2-beta3 y un cambio en la orientación de la hélice 1. Para DCL1-dsRBD1 produjimos cuatro construcciones incluyendo el dominio aislado y el dominio junto a regiones vecinas. El análisis de los espectros 1H-15N HSQC muestra que el dominio está intrínsecamente desordenado en todas las construcciones. Hemos explorado distintas condiciones de solución y aditivos para probar cuál podría llevar al dominio a adquirir una estructura plegada, y encontramos evidencia de que esto sucede en presencia de ARN. Referencias: Rana TM. Nat Rev Mol Cell Biol 8, 23-36 (2007) Xie Z, Khanna K, and Ruan S. Semin Cell Dev Biol 21, 790-797 (2010) Margis R, Fusaro AS, Smith NA, Curtin SJ, Watson JM, Finnegan EJ, Waterhouse PM. FEBS Letters 580, 2442-2450 (2006)