IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Mecanismos que contribuyen a la regulación de la expresión del oncosupresor Disc large, blanco de las oncoproteínas E6 de Papiliomavirus humanos oncogénicos.
Autor/es:
BUGNON VALDANO M, CAVATORTA AL, MARZIALI F, FACCIUTO F, BANKS L, GARDIOL D.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Congreso Argentino de Virologia; 2011
Institución organizadora:
CAV
Resumen:
Los Papilomavirus humanos (HPV) infectan células epiteliales y juegan un rol causal en el desarrollo de cáncer anogenital. Las proteínas E6 de de HPV de alto riesgo interaccionan con el oncosupresor Disc Large (DLG1), estimulando su degradación por el mecanismo dependiente de ubiquitina. DLG1 es el primer blanco reportado de las oncoproteínas E6 que interviene en los mecanismos de control de la polaridad y proliferación celular y en el mantenimiento de la arquitectura de los tejidos. Sin embargo, los mecanismos que regulan la expresión génica de DLG1 no han sido completamente caracterizados, por lo que nos propusimos analizar dichos mecanismos. Hemos reportado que la expresión de DLG1 está disminuida en carcinomas cervicales asociados a HPV y que los factores transcripcionales Snail se unen a la región promotora de DLG1 reprimiendo su actividad. Análisis bioinformáticos de la región promotora demostraron la presencia de sitios de unión a otros factores, entre ellos SP1, que juega un rol importante en el crecimiento y diferenciación celular. Mediante ensayos de luciferasa e inmunofluorescencia pudimos demostrar un efecto activador de SP1 sobre el promotor de DLG1. Más aún, por RT-qPCR observamos que factores de crecimiento, involucrados en la progresión maligna, son capaces de reducir la transcripción de DLG1 de manera dosis-dependiente. Por otro lado, resultados preliminares demostraron una activación del promotor de DLG1 por factores virales de HPV, regulación no reportada hasta el momento. Para profundizar el estudio de la regulación de DLG1, analizamos la región 5? no traducible (5?UTR) de los transcriptos de DLG1, mediante el uso de técnicas de amplificación rápida de los extremos del cADN. De esta manera, identificamos un evento de splicing alternativo en la región 5?UTR del ARNm de DLG1, generándose transcriptos con dos 5?UTR diferentes que hemos denominado short y large. En la forma large se pudo detectar la presencia de un ATG adicional (uATG) que se pierde en la forma short debido al splicing y que reduce la eficiencia de traducción de un marco abierto de lectura clonado corriente abajo. Nos propusimos analizar el rol de este splicing sobre los niveles de expresión de DLG1, correlacionando con las observaciones acerca de la disminución de dicho oncosupresor durante la progresión maligna. Se utilizaron células de distintos tipos de tejidos, trabajando en cada caso con células normales, inmortalizadas y transformadas como modelo in vitro del proceso oncogénico. Cuantificamos los niveles de los transcriptos short y large utilizando técnicas de RT-qPCR con metodología de PCR en tiempo real. Los resultados arrojaron una disminución de la relación 5´UTR short/large con el avance de la progresión maligna, por lo que concluimos que la expresión diferencial de las formas alternativas de 5´UTR podría ser un mecanismo de regulación de los niveles proteicos del oncosupresor DLG1. Estos estudios contribuyen al entendimiento de los mecanismos que regulan la expresión de la proteína de adhesión celular DLG1.