Participación de la proteína Hpa1 de Xanthomonas axonopodis pv. citri en el proceso patógenico

SGRO GG; FICARRA FA; GOTTIG N; OTTADO J

Rosario

Congreso; XIII Congreso-XXXI Reunión Anual- Sociedad de Biología de Rosario; 2011

Las bacterias fitopatógenas colonizan sus hospedadores a través de la secreción de efectores proteicos utilizando el Sistema de Secreción Tipo III (SSTT). Este sistema está codificado por el cluster hrp (respuesta hipersensible (HR) y patogenicidad) y es indispensable para la patogenicidad en plantas hospedadoras y la inducción de HR en plantas no hospedadoras ya que media la translocación de proteínas efectoras a través de la membrana bacteriana y la pared y membrana de la célula vegetal. La HR está caracterizada por una muerte celular programada rápida y local que se induce luego del reconocimiento del patógeno y limita la expansión de la infección. El cluster hrp de Xac contiene un gen codificante para una proteína harpin llamada Hpa1. Las harpins son proteínas ricas en glicina, estables al calor, carentes de cisteínas, secretadas por el SSTT y son capaces de desarrollar HR en plantas no hospedadoras. Con el objetivo de caracterizar la función de la proteína Hpa1 en la cancrosis de los cítricos, se construyó una mutante en este gen por intercambio del marcador. Además, se complementó esta mutante con una copia del gen en un vector replicativo en Xanthomonas, y con este mismo plásmido se conjugaron cepas salvajes de Xac a fin de sobreexpresar este gen. Estas cepas se infiltraron en hojas de naranja y se observó que la cepa mutante fue menos virulenta con menor formación de cancros, además de mostrar un menor crecimiento en planta, mientras que la complementada revirtió el fenotipo y la sobrexpresante mostró un fenotipo similar a la cepa salvaje. Además, purificó la proteína Hpa1 de manera recombinante en Escherichia coli y se determinó que Hpa1 es capaz de generar HR en plantas no hospedadoras. Posteriormente se analizó la participación de Hpa1 pura en la formación de cancros y se observó que el agregado externo de la proteína a la cepa salvaje aumenta el número de cancros, sugiriendo un rol positivo de Hpa1 en la formación de éstos. A fin de determinar si la función de Hpa1 está relacionado con la agregación bacteriana se estudió la formación de agregados bacterianos en presencia y ausencia de Hpa1 mediante microscopía confocal observándose la presencia de agregados en las muestras tratadas con Hpa1. Por último, se demostró que este efecto de asociación también se produce en células bacterianas infiltradas en hojas de naranja. Los resultados obtenidos sugieren que la proteína Hpa1 puede contribuir, al menos en parte, a incrementar la virulencia a través de la agregación bacteriana.