Evaluación de un ensayo de detección del ARN-HCV para el tamizaje molecular de donantes

PEREZ G, MAIDANA F, TABORDA M, GARDIOL D, RUZZINI M, GIRI A.

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Virología; 2011

CAV

El desarrollo y la aplicación de pruebas ultrasensibles y específicas para el tamizaje serológico de donantes han reducido drásticamente transmisión de infecciones virales por transfusión. Sin embargo, el Virus de la Hepatitis C (HCV) sigue siendo el virus con mayor riesgo residual de infección por transfusión por el prolongado período ventana serológico (69 días). En Argentina, la implementación de la Tecnología de Amplificación de Ácidos Nucleicos (NAT) en el ámbito público está retrasada por los costos de los test comerciales, por la falta de desarrollos biotecnológicos regionales, el retraso de regulaciones locales para el NAT de donantes y la falta de laboratorios centralizadores.En nuestro laboratorio se desarrolló el ensayo RT-PCR/CIC HCV con un formato operativo, no requiere instrumental ni reactivos sofisticados, detecta todos los genotipos circulantes en Argentina e incluye un Control Interno Competitivo (CIC) estable. En este trabajo se presenta la validación del ensayo RT-PCR/CIC HCV como sistema NAT en muestras individuales de plasma bajo los lineamientos del Instituto Paul Ehrlich.Para determinar el límite de detección y la sensibilidad analítica del ensayo, se utilizó el Estándar Internacional de ARN del HCV (EIHCV) de la OMS (código 96/798). El EIHCV fue diluido en plasma negativo en 2.000, 200, 100, 50, 20 UI/reacción. Se analizaron 20 repeticiones de cada concentración en 5 días diferentes para minimizar el efecto de los errores de manipulación. La extracción de los ARN (HCV y CIC) se realizó a partir de 150 μl plasma con un sistema comercial (NucleoSpin RNA Virus, Macherey-Nagel). La positividad o negatividad de los resultados se determinó en base al valor de corte establecido como 2 veces la media de las densidades ópticas a 450 nm de los controles negativos utilizados en cada experimento.Se realizó un análisis de progresión probit con la proporción de resultados positivos de cada réplica de 20 en relación a las concentraciones correspondientes para determinar la mínima cantidad detectable con un intervalo de confianza continuo de 95% (IC95%) en el rango probado. El ensayo RT-PCR/CIC HCV como sistema NAT arrojó un límite de detección de 5 UI/reacción y una sensibilidad analítica de 79 UI/reacción (IC95%: 59,0 ? 136,6 UI/reacción). La sensibilidad clínica se evaluó en 101 muestras de plasma en doble ciego procedentes del Servicio de Hemoterapia (Hospital Provincial del Centenario) rechazadas para transfusión por poseer algún marcador serológico positivo o por autoexclusión. Se obtuvieron 7/101 (6.9%) muestras reactivas por NAT según el valor de corte. La única muestra con serología reactiva (1/101) fue detectada por NAT. No se detectaron inhibiciones en la reacción. Los individuos con NAT detectable/Acs a-HCV No reactivos han sido citados para confirmar o descartar la eventual infección en periodo ventana por HCV. En conclusión, los resultados preliminares mostraron un desempeño satisfactorio del ensayo en evaluación.