CÓMO PUEDE EL SENSOR DESK SENTIR FRÍO?

MARIA EUGENIA INDA; EUGENIA ZABALLA; CYBULSKI LARISA; VILA ALEJANDRO; DE MENDOZA DIEGO

BUENOS AIRES

Congreso; XL REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BIOFÍSICA; 2011

Los termosensores son proteínas integrales de membrana involucrados en muchos roles fisiológicos tales como la quimiotaxis, el remodelado de la membrana, y la percepción de presión y dolor. El termosensor DesK, de Bacillus subtilis, es una histidina quinasa de cinco pasos transmembrana capaz de detectar cambios físicos en la membrana que le permite a la bacteria adaptarse a las variaciones de la temperatura. Sin embargo, hasta el día de hoy el mecanismo por el cual el dominio transmembrana (TM) percibe y transmite la señal de temperatura se desconoce. Nos proponemos entonces entender el novedoso mecanismo que dispara la activación de DesK. Para eso diseñamos una proteína híbrida, constituida por una proteína de fusión compuesta por un segmento transmembrana quimérico (STM) formado por 17 residuos del primer STM y 14 residuos del corazón hidrofóbico del quinto STM, que se continúa con el dominio citoplasmático de DesK. Esta proteína quimérica con un único STM alberga la esencia del funcionamiento de un sensor biológico, por lo que fue denominado sensor mínimo- DesK (SM-DesK)1. Con el objetivo de entender los cambios estructurales del sensor mínimo de DesK en la bicapa en función de la temperatura, estamos realizando estudios de RMN sobre la región transmembrana del sensor mínimo integrada en bicelas de DMPC:DHPC. Hasta el momento, hemos conseguido sobreexpresar el segmento transmembrana marcado uniformemente con 15N y hemos verificado su inserción en bicelas del tamaño esperado. Los resultados estructurales nos ayudarán a entender los estudios realizados in vivo mediante mutagénesis sitio dirigida.