IBR   13079
INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Rol del flagelo de Xanthomonas axonopodis pv. citri durante el desarrollo de biofilms en limonero.
Autor/es:
ROESCHLIN R.A.; ENRIQUE R.; MALAMUD F.; SICILIANO F.; VOJNOV A. ; MARANO M.R.
Lugar:
Rosario
Reunión:
Jornada; IV Jornada de Ciencia y Tecnología de la Universidad Nacional de Rosario.; 2010
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
La bacteria fitopatógena Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac) es el agente responsable de la Cancrosis Bacteriana de los Cítricos (CBC), enfermedad endémica en Argentina. La mayoría de los cultivares de cítricos son moderados a altamente susceptibles a Xac. Previamente hemos demostrado que Xac desarrolla biofilms sobre superficies bióticas y abióticas, y que la presencia de biofilms asociados con la planta se correlaciona con la patogenicidad de Xac y el desarrollo del cancro en limonero. El objetivo de nuestro trabajo es profundizar en el conocimiento de la dinámica de la interacción Xac–limonero durante el desarrollo de CBC. En particular se ha investigado el rol del flagelo en la movilidad, formación de biofilm y virulencia de Xac durante la formación del cancro cítrico. Para ello se trabajó con cepas mutantes de Xac afectadas en la biosíntesis del flagelo, una deficiente en flagelina (MfliC) y otra deficiente en la proteína de anclaje de la flagelina (MflgE). Dichas mutantes fueron caracterizadas fenotípica y molecularmente mediante curvas de crecimiento in-vitro,   ensayos de movilidad en placa, así como también mediante la tinción del flagelo con cristal violeta y el análisis de la presencia de flagelina por Western blot. Se evaluó la patogenicidad de las cepas en estudio en hojas de limonero y se monitoreó el progreso de la enfermedad con curvas de crecimiento in-vivo y mediante el análisis del desarrollo del biofilm utilizando microscopía de escaneo láser confocal (CLSM). Además, se analizó la respuesta de defensa temprana inducida por la flagelina de Xac en hojas de limonero siguiendo la producción de H2O2 por tinción con diclorofluoresceína y observación en CLSM. Los movimientos tipo swimming y swarming, exclusivos del flagelo, se observaron únicamente en la cepa salvaje de Xac. Bajo determinadas condiciones se observó que Xac es capaz de moverse de manera independiente del flagelo y dependiente de la producción de exopolisacáridos. El análisis de la estructura del biofilm mostró que la movilidad mediada por flagelo es requerida para el desarrollo del biofilm maduro en hojas de limonero. No obstante, la pérdida del filamento en las mutantes MfliC no afecta su virulencia, probablemente debido a que la movilidad per se no es requerida para la patogénesis en limonero. Por el contrario, la pérdida de la estructura del filamento y del gancho en las mutantes MflgE no sólo afecta la formación del biofilm maduro por la pérdida de la movilidad sino que también afecta la virulencia de la cepa bacteriana. El análisis de la respuesta de defensa temprana demostró que tanto Xac salvaje como MfliC inducen la producción de H2O2, no así MflgE. Los resultados presentados sugieren que el gancho expuesto en la superficie de las bacterias MfliC es reconocido por “receptores” de la célula vegetal que inducirían una respuesta de defensa temprana. No obstante, esta respuesta de defensa no perturba el crecimiento y la patogénesis desarrollada por MfliC en la hoja de limonero. Conocer como el patógeno es reconocido por la planta contribuirá al desarrollo de estrategias biotecnológicas para un manejo sustentable de la enfermedad.