Identificación de proteínas periplasmáticas involucradas en la biogénesis de metalo-beta-lactamasas en bacterias Gram-negativas

BRAMBILLA, L.; VIALE, A.M.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

IDENTIFICACION DE PROTEINAS PERIPLASMATICAS INVOLUCRADAS EN LA BIOGENESIS DE MbL EN BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS. Luciano Brambilla, Alejandro Viale IBR (CONICET), Departamento de Microbiología, FCByF, U.N.R., Rosario, Argentina. La producción de metalo-b-lactamasas (MbL) por parte de bacterias Gram-negativas es uno de los mecanismos de resistencia a antibióticos b-lactámicos mas comunes. GOB-18 es una MbL dependiente de Zn identificada en el patógeno oportunista Elizabethkingia meningoseptica. Una vez sintetizada en el citoplasma bacteriano es secretada de manera desplegada al espacio periplasmático donde ocurre la adquisición del ión Zn (II) y su plegado final al estado nativo. Nosotros estamos estudiando factores proteicos que intervienen en la biogénesis/ensamble de MbLs y recientemente hemos determinado que la secreción de GOB en Escherichia coli  requiere la cooperación del sistema DnaK con la maquinaria de secreción Sec. Hemos identificado también que la ausencia de la proteína periplasmática DacD disminuye la resistencia a cefotaxima sugiriendo que DacD coopera en la biogénesis de la GOB en el periplasma. El objetivo de este trabajo ha sido elucidar el rol de DacD en este proceso. Con este fin se obtuvieron a través de shock  hiposmótico las fracciones de proteínas periplasmaticas de las cepas parental de E. coli y mutante por deleción en dacD y se analizaron por western blot con anti-GOB lo cual reveló menores cantidades de la enzima en la cepa mutante. Utilizando fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) como inhibidor de proteasas se observó un aumento en las cantidades de GOB en los extractos así como la restitución de los niveles de resistencia en la mutante, señalando a la degradación como destino final de GOB secretada en la cepa mutante. Estos resultados sugieren que DacD participa en la estabilidad/ensamble de la MbL GOB en el periplasma bacteriano