ANÁLISIS DE HPA1, UNA PROTEÍNA HARPIN DE Xanthomonas axonopodis pv. citri

SGRO GG; DUNGER G; ORELLANO EG; GOTTIG N; OTTADO J

Rosario

Jornada; IV Jornada de Ciencia y Tecnología 2010 UNR; 2010

Las bacterias fitopatógenas colonizan sus hospedadores a través de la secreción de efectores proteicos utilizando el Sistema de Secreción Tipo III. Este sistema está codificado por el cluster hrp (hypersensitive response (HR) y pathogenicity) y es indispensable para la patogenicidad en plantas hospedadoras y la inducción de HR en plantas no hospedadoras ya que media la translocación de proteínas efectoras de patogenicidad. La HR está caracterizada por una muerte celular programada rápida y local que se induce luego del reconocimiento del patógeno y frena la expansión de la infección. El cluster hrp de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) contiene un gen que codifica para una proteína harpin llamada Hpa1. Estas proteínas son estables frente al calor, ricas en glicinas y pueden formar poros en las membranas provocando en algunas plantas el desarrollo de HR. Con el objetivo de estudiar la funcionalidad de la proteína Hpa1 de Xac, la misma se expresó en forma recombinante y se purificó. Se determinó que Hpa1 produce HR en plantas no hospedadoras pero no en plantas hospedadoras (Citrus sinensis). A fin de estudiar el efecto de Hpa1 durante la enfermedad, la proteína se co-infiltró con suspensiones de distintas concentraciones de Xac observándose siempre una mayor cantidad de cancros en presencia de Hpa1. A su vez, a muy bajas CFU de Xac se observó el desarrollo de HR, indicando que en este caso Hpa1 puede inducir una HR dependiente de algún determinante bacteriano. Este efecto se ve solapado a altas CFU de Xac debido al desarrollo de la enfermedad. Por otro lado, se analizó a través de microscopía confocal de fluorescencia, el efecto que produce la proteína Hpa1 sobre suspensiones bacterianas de Xac. En estos ensayos se observó que Hpa1 tiene la capacidad de aglutinar bacterias. Este efecto aglutinante probablemente este aumentando, en una región, la cantidad aparente de bacterias, favoreciendo así la patogénesis cuando las bacterias se encuentran en baja concentración.