Phytomonas Jma: la biosíntesis y el transporte modulan la concentración endógena de poliaminas en medio rico.

MOROSI LG; MARCORA MS; GONZÁLEZ NS; ALGRANATI ID; CARRILLO C

Ascochinga,Córdoba

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

SAP

Las poliaminas son compuestos esenciales para la supervivencia y proliferación celular; siendo putrescina y espermidina las poliaminas más abundantes en tripanosomátidos. La ornitina decarboxilasa (ODC), enzima presente en procariotas y en la mayoría de los eucariotas, cataliza el primer paso de biosíntesis, cuyo sustrato es la ornitina y su producto, putrescina; la cual a su vez precursor de espermidina, vía espermidina sintasa. Nuestro modelo de estudio pertenece al género Phytomonas, que agrupa tripanosomátidos patógenos de diversas plantas de importancia económica. En trabajos anteriores demostramos que las poliaminas son esenciales para la supervivencia de Phytomonas Jma, y son sintetizadas vía ODC. En este trabajo encontramos que en medio rico BHT, la proliferación de las phytomonas se vió marcadamente reducida en presencia de DFMO y CHA, inhibidores de ODC y espermidina sintasa respectivamente (pasando de un tiempo de duplicación de ~11 hs y una densidad máxima de ~100x106 células/ml a un tiempo de duplicación mayor a 48hs y a una densidad máxima de ~20x106 células/ml). En presencia de los inhibidores por 7 días o más, el cultivo entró en un estado de muerte irreversible. Sin embargo, cuando DFMO y CHA eran removidos del medio dentro de los 5 primeros días, el cultivo recuperaba la tasa proliferativa. Cuantificando las poliaminas endógenas por HPLC, en fase logarítmica se encontró una concentración de putrescina de ~7 nmoles/108células y espermidina de ~20 nmoles/108células. En fase estacionaria, la putrescina mantuvo valores similares mientras que la espermidina aumentó a ~30 nmoles/108células. Este aumento no fue reflejo de un aumento en la síntesis de poliaminas; por el contrario, la actividad de ODC pasó de una actividad de 12 nmol/h/mg prot en fase logarítmica a una de 1,2 nmol/h/mg prot en fase estacionaria. Al determinar el transporte desde el medio extracelular, putrescina presentó valores de ~0,4pmol/min/107cél, en fase logarítmica y de ~0,6 pmol/min/107cél en estacionaria; este aumento fue aún más notable en espermidina (que pasó de ~2,7pmol/min/107cél a ~7pmol/min/107cél). Estos resultados sugieren que, en fase estacionaria, el transporte de poliaminas compensaría la disminución de la actividad ODC, sin descartar que otros mecanismos como la redistribución de poliaminas endógenas puedan estar también involucrados.