CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Las herramientas de genética inversa permiten determinar funciones génicas a partir del análisis de secuencias de ADN y conectan las áreas de genómica estructural y funcional. En plantas, estas estrategias se basan frecuentemente en mutágenesis de inserción y ARN de interferencia, métodos que son aplicables a pocas especies y que generan un espectro limitado de pérdidas de función génica. Recientemente, se ha desarrollado la tecnología de TILLING (Targeting Induced Local Lesions IN Genomes) que permite detectar mutaciones puntuales en todo tipo de genomas. Este método incluye la mutagénesis química de individuos, la extracción de su ADN y la amplificación por PCR de grupos de muestras. El ADN amplificado es desnaturalizado y renaturalizado para formar ADN heteroduplex entre la cepa silvestre y las mutantes para, a continuación, ser digerido con la endonucleasa CEL I. Este enzima reconoce los desapareamientos presentes en el ADN heteroduplex lo que permite identificar de forma eficiente mutaciones del gen amplificado. Esta tecnología es fácilmente automatizable y potencialmente aplicable a cualquier gen de cualquier organismo y a todo tipo de polimorfismos puntuales, tanto inducidos como presentes en variantes naturales (ECOTILLING). En la actualidad, numerosos laboratorios trabajan en la adaptación de la metodología TILLING para su uso en modelos animales. En el marco del proyecto GEFA, dentro de la Acción estratégica de Genómica y Proteómica de la DGI, se ha desarrollado un nuevo servicio de TILLING de Arabidopsis denominado TILLer. Este programa ha financiado la generación de una colección permanente de mutantes en el fondo genético Ler, la construcción y organización de colecciones de semillas y ADNs y la puesta a punto del sistema de detección de mutaciones basado en la actividad de CEL I. Una limitación en la detección de mutaciones ha sido la disponibilidad de CEL I en cantidad y calidad suficiente, pues su purificación mediante métodos tradicionales es cara y laboriosa ya que incluye múltiples cromatografías de afinidad e intercambio iónico. El servicio de TILLING y la Unidad de Protein Tools han desarrollado anticuerpos que permiten purificar CEL I mediante cromatografía de afinidad, en una sola etapa. Adicionalmente, se ha diseñado un inmunoensayo que podría facilitar la detección de mutaciones en los protocolos de TILLING.