DELIMITANDO E.L ROL REGULATORIO DE P21 EN LA TOLERANCIA AL ADN DAÑADO ACOPLADA A FASE S

MANSILLA SF, SORIA G , SPERONI J , GOTTIFREDI V

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIV Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

SAIC

DELIMITANDO EL ROL REGULATORIO DE P21 EN LA TOLERANCIA AL ADN DAÑADO ACOPLADA A FASE S S F Mansilla 1 , G Soria 1 , J Speroni 1 , V Gottifredi 1 1Laboratorio de Ciclo Celular y Estabilidad Genómica, Fundacion Instituto Leloir<smansilla@leloir.org.ar> - CAPITAL FEDERAL Resumen : Durante la replicación del ADN  la célula debe evitar bloqueos en la horquilla de replicación  ocasionados por el encuentro con ADN dañado. La síntesis a través de lesiones (TLS-translesion DNA synthesis) involucra el intercambio de la polimerasa replicativa por una polimerasa permisiva  capaz de sintetizar usando como molde ADN dañado. Esto garantiza la continuidad de la replicación aunque con la potencialidad de aumentar la mutagénesis. El motivo es que las polimerasas  de TLS tienen sitios activos más amplios y no poseen actividad de lectura de prueba. Se han identificado diversas polimerasas permisivas con especificad diferencial para distintos tipos de ADN dañado (ej. Polη  es específica para síntesis a través de dímeros de timina generados por la irradiación UV). A pesar de que estas polimersas fueron caracterizadas en profundidad a nivel bioquímico, poco se sabe de la regulación de su actividad. Nuestro grupo identificó  a p21 como el primer regulador negativo de TLS. p21 actúa tanto  modulando modificaciones post-traduccionales en PCNA (proteína que sirve como plataforma para el cargado de polimerasas) relevantes para TLS, como así también bloqueando directamente el cargado de Polη  sobre PCNA.  Nuestro objetivo es determinar si el efecto de p21 se extiende a todas las polimerasas de TLS o si esta restringido a Polη. En este trabajo utilizando mutantes de p21 estables (no degradables después de irradiación UV) logramos demostrar que todas las polimerasas de TLS se ven afectadas por la presencia de esta proteína. Esto se evidencia a través del bloqueo del reclutamiento de estas polimerasas a la zona de daño y como una disminución en el porcentaje de células que logran reclutamiento a ADN dañado en respuesta a UV.  Por último, para estudiar de manera global el efecto de p21 sobre TLS, utilizamos un método de análisis de moléculas únicas de ADN por imágenes de alta resolución que permite detectar cambios sutiles en el avance de la horquilla de replicación.