INHIBICIÓN IN VITRO DE LA EXPRESIÓN DE SPARC (SECRETED PROTEIN, ACIDIC AND RICH IN CYSTEINE) EN CÉLULAS ESTRELLADAS HEPÁTICAS. EFECTOS BIOLÓGICOS

CATALINA ATORRASAGASTI; JORGE B. AQUINO; LAURA ALANIZ; MARIANA MALVICINI; OSVALDO PODHAJCER; MARCELO SILVA; GUILLERMO MAZZOLIN

buenos aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Hepatología; 2009

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Batang; panose-1:2 3 6 0 0 1 1 1 1 1; mso-font-alt:"Arial Unicode MS"; mso-font-charset:129; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:fixed; mso-font-signature:1 151388160 16 0 524288 0;} @font-face {font-family:"@Batang"; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-charset:129; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:fixed; mso-font-signature:1 151388160 16 0 524288 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:72.0pt 90.0pt 72.0pt 90.0pt; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Introducción: Hemos observado previamente que la transferencia génica mediada por adenovirus de una secuencia antisentido para SPARC (AdasSPARC) fue capaz de atenuar el proceso necroinflamatorio y disminuir la fibrosis hepática en un modelo de intoxicación crónica con TAA (tioacetamida) en ratas (Camino et al. 2008). La células estrelladas hepáticas (CE) desempeñan un papel fundamental en el proceso fibrogénico hepático. Objetivos: Explorar in vitro en CE los mecanismos de atenuación de la fibrosis al inhibir SPARC. Materiales y Métodos: Se utilizó una línea de CE, denominada CFSC-2G. La expresión de SPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia. Se utilizó el AdasSPARC para inhibir la proteína. Para incrementar la inhibición de SPARC se emplearon ARN de interferencia específico (siRNA). Se estudió la expresión de la citoquina TGF-b1 por ELISA. Se evaluó proliferación celular por el método de incorporación de timidina tritiada, apoptosis por naranja de acridina/bromuro de etidio, la migración en cámaras transwell y la adhesión celular. Resultados: Si bien se utilizó un AdasSPARC para inhibir la expresión de SPARC in vivo, in vitro se obtuvieron mejores resultados inhibitorios al utilizar ARN de interferencia. El siRNA específico para SPARC (siSPARC) redujo la expresión del ARNm de SPARC a las 72 hs (80% de reducción vs. control). La migración de las células CFSC-2G transfectadas con siRNA disminuyó significativamente, tanto en respuesta a PDGF-BB (p=0,0002) como a TGFb1 (p=0.011). La proliferación celular no se afectó significativamente aunque se observó una tendencia a la  apoptosis tardía en el grupo siSPARC. La adhesión a fibronectina de las CE tratadas con siSPARC aumento significativamente (p=0,027). Más aun, se observaron cambios en los patrones de organización de los filamentos de actina del musculo liso en las células tratadas con siSPARC. La secreción de TGFb1 en el sobrenadante de las células transfectadas con el siRNA para SPARC fue menor que las tratadas con el siRNA control (1503pgr/ml±169 vs 2634±26 pgr/ml). Conclusiones: La regulación negativa de la expresión de SPARC en CE resulta en una disminución de la capacidad migratoria de las células estrelladas activadas, especialmente en respuesta a PDGF-BB y TGF-b1, así como en la producción de TGF-b1. SPARC podría ser considerada un nuevo blanco terapéutico en fibrosis hepática.