IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de gránulos de silenciamiento: cuerpos de procesamiento y gránulos de estrés en la infección in vitro del virus Junín
Autor/es:
LINERO F; THOMAS MG; BOCCACCIO GL; SCOLAROLA
Lugar:
Cordoba
Reunión:
Congreso; SAV (Sociedad Argentina de Virología); 2009
Institución organizadora:
SAV (Sociedad Argentina de Virología).
Resumen:
El estudio de la participación de los denominados “gránulos de silenciamiento” tales como gránulos de estrés (SGs) y cuerpos de procesamiento (Processing bodies=PBs) en el control post transcripcional de la expresión proteica ha cobrado reciente interés en el campo de la virología debido a la utilización que algunos virus hacen de dichas estructuras para aumentar la eficiencia de su replicación. Se ha demostrado que mientras algunos virus inhiben la formación de SGs y/o PBs para impedir que la célula infectada responda a la infección, otros, inducen la formación de los mismos para inhibir la síntesis de proteínas celulares, favoreciendo la expresión de las proteínas virales .El objetivo del siguiente trabajo fue determinar la respuesta de células Vero a la infección aguda con el virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, desde el punto de vista de la formación  SGs y PBs. En primer lugar se evaluó si la infección aguda con JUNV induce la formación de SGs analizando los marcadores TIA-1 y PABP-1, característicos de estas estructuras. Para ello células Vero fueron infectadas con JUNV a una MOI de 1 UFP/cél. y a las 24 y 48 hs p.i., fueron procesadas para inmonufluorescencia indirecta (IFI). Los resultados mostraron que en ninguno de los tiempos evaluados se observó la formación de SGs ni la translocación de los marcadores TIA-1 o PABP-1. Por otro lado se evaluó la participación de PBs mediante los marcadores Hedls y eIF4E, no detectándose diferencias significativas en ambos tiempos de infección. Nuestro próximo objetivo fue evaluar si la infección con JUNV interfiere con la formación de los SGs y PBs inducidos con arsenito de sodio (inductor de estrés). Células Vero fueron infectadas con JUNV y previamente a ser procesadas para IFI fueron tratadas durante 1 hora con arsenito de sodio. Se analizaron los marcadores de SGs TIA-1y PABP-1, el marcador de PBs, Hedls y el marcador común de SGs y PBs, eIF4E, no  observándose diferencias significativas en el número de PBs positivos para Hedls y eIF4E. Sin embargo se observó que a medida que avanzaba la infección el cultivo se tornaba más resistente a la formación de SGs inducida por arsenito, detectándose un rango de reducción de entre 60-80 %  las 48 hs p.i. Dado que los mRNAs de JUNV poseen estructuras Cap en sus extremos 5’ y que la traducción eficiente de los mRNA con dicha estructura requiere de la unión del factor eIF4E, evaluamos si la resistencia a la formación de SGs se debía al requerimiento de dicho factor para la traducción viral. El empleo de un plásmido dominante negativo para 4E-BP (mantiene inactivo a eIF4E) y de compuestos inhibidores de la vía cap-dependiente no afectaron la síntesis de antígenos virales ni la replicación del virus. Por otro lado la  inmunoprecipitación con eIF4E en células infectadas con JUNV, no mostró interacción con mRNA virales (mRNA de N) aunque si se detectó la interacción con el mRNA de actina. Los resultados obtenidos permiten concluir  que la infección de células vero con JUNV no induce la formación de SGs e impide la formación de los mismos frente a la inducción con arsenito de sodio. Esta estrategia no se debería a la necesidad de contar con el eIF4E activo, sino de otro/s factores participantes de dichas estructuras.