La inhibición del transporte de Cl- a través del canal CFTR modula la actividad del complejo i mitocondrial.

VALDIVIESO, ANGEL G; TAMINELLI, GUILLERMO L; MARIN, MARIA C; PAGANO, ELEONORA S; TEIBER, MARÍA L; SANTA COLOMA, TOMÁS A

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

529 (50) LA INHIBICIÓN DEL TRANSPORTE DE CL- A TRAVÉS DEL CANAL CFTR MODULA LA ACTIVIDAD DEL COMPLEJO I MITOCONDRIAL A G Valdivieso 1 2 3, G L Taminelli 2 3, M C Marin 1 2 3, E S Pagano 2 3 4, M L Teiber 2 3, T A Santa Coloma 1 2 3 4 1Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA; 2Fundación Instituto Leloir; 3Programa de Investigaciones Biomédicas, Facultad de Ciencias Médicas, Pontificia Universidad Católica Argentina UCA; 4Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires-CONICET. La Fibrosis Quística (FQ) es producida por mutaciones en el canal de Cl- CFTR. En estudios previos hemos demostrado una regulación negativa del gen mitocondrial MTND4 en FQ (BBRC 356:805, 2007). Este gen codifica la subunidad ND4 del Complejo I mitocondrial (CIm), que es fundamental para su actividad; por lo tanto, la reducción de su expresión en FQ podría inducir una falla en la actividad del CIm. Para comprobar esta hipótesis, se determinó la actividad del CIm mediante Blue Native-PAGE a partir de mitocondrias aisladas de células derivadas de pacientes con FQ (CFDE e IB3-1) y de las mismas células con la expresión del CFTR corregida mediante la expresión ectópica de CFTR salvaje (células CFDE/6RepCFTR y S9). Se observó una disminución en la actividad del CIm de ~ 45% en las células FQ con respecto a las células corregidas. Para independizarnos de la posible diferencia de genotipo entre las distintas células FQ utilizadas y de los efectos de la sobreexpresión del CFTR en las células corregidas, decidimos utilizar células T84, de carcinoma de colon, que expresan CFTR normal. Para modular la actividad del CFTR usamos dos inhibidores farmacológicos del transporte de Cl- por CFTR (glibenclamida y CFTR(inh)172); también usamos plásmidos de RNA de interferencia (RNAi) con el fin de reducir la expresión del CFTR. Se observó así una disminución significativa de la actividad del CIm (~ 45%), tanto en células tratadas con inhibidores farmacológicos como en células transfectadas con RNAi. Estos resultados sugieren que existe una falla mitocondrial en FQ, localizada en el CIm. Asimismo, que sería la actividad de transporte de Cl- a través del CFTR, no su presencia en la membrana, la que modularía la actividad del CIm. La reducción en la actividad del CIm podría inducir un aumento en especies reactivas de oxígeno (ROS) y en la apoptosis, efectos ya observados en FQ. Agradecimientos: subsidios UBA (X-156), ANPCyT (PICT 13907), becas del CONICET (MCM, ESP y AGV) y UCA (GLT).