IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización parcial de una proteína nuclear de localización mitocondrial denominada CISD1 cuya expresión es modulada por el canal de Cl- CFTR
Autor/es:
TAMINELLI, GUILLERMO L; VALDIVIESO, ANGEL G; MARÍN, MARÍA C; TEIBER, MARÍA L; PAGANO, ELEONORA S; SANTA COLOMA, TOMÁS A
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
537 (152) CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE UNA PROTEÍNA NUCLEAR DE LOCALIZACIÓN MITOCONDRIAL DENOMINADA CISD1 CUYA EXPRESIÓN ES MODULADA POR EL CANAL DE CL- CFTR G L Taminelli 3 4 , A G Valdivieso 2 3 4, M C Marín 2 3 4, M L Teiber 3 4 , E S Pagano 1 3 4 , T A Santa Coloma 1 2 3 4, 1Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires-CONICET, 2Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA, 3Fundación Instituto Leloir, 4Programa de Investigaciones Biomédicas, Facultad de Ciencias Médicas, Pontificia Universidad Católica Argentina (UCA) Previamente hemos caracterizado parcialmente un nuevo gen denominado CISD1, dependiente del canal de cloruro CFTR, que codifica una proteína de localización mitocondrial y función aún desconocida (BBRC 365: 856, 2008). El ARNm de CISD1 está modulado negativamente en células CFDE (provenientes de un paciente con fibrosis quística) y los niveles son restaurados en células CFDE que expresan ectópicamente CFTR wt (células CFDE/6RepCFTR). Estos resultados fueron confirmados mediante FISH confocal, hibridación in situ en cortes de tejidos de pulmón, RT-PCRs semi-cuantitavias y RT-PCR en tiempo real. El tratamiento con glibenclamida (50 µM) o CFTR(inh)-172 (5 µM) en células CFDE/6RepCFTR, produjo una reducción en los niveles del ARNm de CISD1. Mediante la expresión de una quimera CISD1-GFP en células CFDE, hemos comprobado por microscopía confocal una localización mitocondrial predominante, predicha previamente mediante el programa PSORT II (http: //psort.nibb.ac.jp/form2.html). En células CFDE que expresan esta quimera se observaron importantes alteraciones en la estructura de las mitocondrias. Cabe destacar que ha sido imposible seleccionar y mantener en cultivo células CFDE o T84 transfectadas con dicha quimera, ya que las células en esas condiciones sobreviven muy pocos pasajes. Recientemente, otros autores han demostrado que CISD1 posee un dominio con 3 Cys y 1 His que unen un cluster 2Fe-2S (Wiley y col, PNAS 104:5318, 2007). Teniendo en cuenta los resultados con la quimera y con el objeto de estudiar la posible función de CISD1, hemos diseñado una mutante en la cual las cisteínas 72 y 74, que intervienen en la unión al cluster 2Fe-2S, han sido reemplazadas por serinas, con la idea de crear un dominante negativo. Esta construcción fue recientemente transfectada en células T84 con el fin de estudiar mediante citometría de flujo los posibles efectos sobre diversas funciones mitocondriales. Agradecimientos: subsidios UBA (X156), ANPCyT (sub. PICT 13907) y UCA.