IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
REQUERIMIENTO DIFERENCIAL DE ESTRUCTURAS DE ARN PARA LA REPLICACIÓN DEL VIRUS DEL DENGUE EN DISTINTOS HOSPEDADORES
Autor/es:
DE BORBA. L.; VILLORDO, S.M.; IGLESIAS, N.G.; FILOMATORI C.V.; GEBHARD, L.; GAMARNIK, A.V.
Lugar:
CABA
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
El virus del dengue (DENV) esun miembro de la familia Flaviviridae,que incluye otros patógenos importantes, como el virus de la fiebre amarilla(YFV), el virus del Nilo Occidental (WNV), el virus de la encefalitis de Saint Louis(SLEV) y el virus de la encefalitis japonesa (JEV). El genoma del DENV es unamolécula de ARN, simple cadena y polaridad positiva que contiene un único marcoabierto de lectura flanqueado por regiones muy estructuradas, 5? y 3? notraducidas (UTRs). Elementos de ARN situados dentro de estas regiones sonresponsables de la iniciación de la traducción y la replicación del genoma.El genoma del DENV es unamolécula dinámica que adopta conformaciones alternativas, lineales ycirculares, que son necesarias para la replicación del ARN viral y elequilibrio entre estas formas del genoma es crucial para la infectividad del virus.Recientemente, identificamos una estructura de ARN en la región codificante dela proteína de cápside, a la que llamamos C1, que facilita la circularizacióndel genoma viral. Este proceso esta mediado por interacciones ARN-ARN de largadistancia por complementariedad de bases entre la secuencia conservada C1 y unasecuencia del 3?UTR contenida en una estructura llamada dumbbell 1 (DB1). Empleando genética reversa junto con estudiosbioquímicos pudimos demostrar que dichas interacciones de larga distanciaaumentan la eficiencia de replicación del ARN viral. En todos los serotipos deDENV, la estructura DB1 se encuentra duplicada (DB2). Si bien anteriormente seha postulado que ambos DBs serían necesarios para una replicación viral eficiente,aún se desconoce cómo funcionan en forma individual. Debido a que nuestrosestudios recientes le asignan un rol específico a secuencias del DB1, nospropusimos extender el análisis al DB2. Utilizando un clon infeccioso del DENV2 quecodifica para una luciferasa como reportero, diseñamos deleciones de cada unode los DBs o incorporamos mutaciones que alteren la estructura de los mismos. Lasmoléculas de ARN viral fueron transfectadas en células de mosquito y de mamíferocrecidas en cultivo y la replicación fue evaluada a distintos tiempos por mediode actividad luciferasa. Los resultados indican que la deleción del DB1 disminuyenotablemente la replicación viral, corroborando la importancia de su presenciapara la interacción de larga distancia con la secuencia C1 de cápside. Por otrolado, la deleción del DB2 aumentó más de 10 veces la replicación viral en célulasde mosquito C6/36, sugiriendo que esta estructura modula negativamente lareplicación en dichas células. Sorprendentemente el virus con la deleción delDB2 infectó y replicó en células de mamífero a niveles comparables al virusparental.  Estos resultados resaltan unrequerimiento diferencial de estructuras de ARN del 3?UTR para la replicación delDENV en células de mosquito y mamífero.