LA PROTEÍNA NS3 DEL VIRUS DEL DENGUE DESEMPEÑA UN ROL ESENCIAL EN LA PRODUCCIÓN DE PARTÍCULAS VIRALES INFECTIVAS

GEBHARD, L.; IGLESIAS, N.G.; BYK, L; DE MAIO, F.A.; GAMARNIK, A.V.

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

La proteína noestructural 3 (NS3) del virus del dengue (DENV) es una proteína multifuncional(69 kDa) que contiene las actividades de serin-proteasa, ARN-helicasa y NTPasa.Estas actividades enzimáticas son esenciales para la replicación viral. Sudominio de proteasa (residuos 1 al 169) escinde la poliproteína viral enmúltiples sitios. Su dominio helicasa/NTPasa (residuos 179 al 618) asiste a laARN-polimerasa viral en la síntesis y amplificación del genoma viral. Estosdominios funcionales y estructurales están unidos a través de una regióninterdominio de 9 residuos de aminoácidos. Además, se ha implicado al dominiohelicasa de la NS3 del virus de la fiebre amarilla (YFV) en desempeñar un papelen el ensamblado de las partículas virales, aunque su función en este procesoes hasta ahora desconocida.Paradeterminar el papel de la NS3 del DENV en la formación de las partículasvirales, se utilizó genética inversa para llevar a cabo una mutagénesis debarrido por alaninas en la secuencia de la NS3 de un clon infeccioso del DENV. Paraeste estudio también se utilizó un virus monocistrónico reportero que expresaluciferasa. Teniendo en cuenta la estructura cristalográfica conocida de laNS3, se obtuvieron 30 mutantes del DENV con cambios en residuos superficiales situadosen los dominios de proteasa, helicasa, y la región interdominio. De acuerdo alos niveles de expresión del gen de luciferasa en células transfectadas con elvirus reportero, algunos mutantes mostraron defectos moderados o severos en lareplicación viral. Otros mutantes fueron capaces de replicarse y producir virusinfecciosos tan eficientemente como el virus original. Notablemente, ciertos mutantesreplicaron de manera eficiente, con niveles de expresión de proteínas y ARN viralessimilares al virus original, pero tuvieron graves defectos e inclusoimpedimentos en la producción de partículas infectivas. De esta manera seidentificaron ciertos residuos situados en los dominios de proteasa, helicasa yla región interdominio de la NS3 que son esenciales para el ensamblaje delvirión y, consecuentemente, para la producción de partículas infecciosas del DENVtanto en células de mamífero como de mosquito.En estetrabajo se estableció que el ensamblado del virus del dengue y la producción departículas infecciosas son procesos sensibles a mutaciones puntuales enresiduos superficiales que no afectan las actividades enzimáticas de laproteína NS3 y que los dominios de proteasa, helicasa y la región interdominiode la NS3 están involucrados en estos procesos.