IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Optimización de BLS como sistema presentador de antígenos para la generación de una vacuna a subunidad polivalente para rotavirus bovino
Autor/es:
BELLIDO D; CRAIG PO; MOZGOVOJ M; GONZALEZ D; WIGDOROVTIZ A; GOLDBAUM FA; DUS SANTOS MJ
Lugar:
Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virologia (SAV)
Resumen:
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La utilización de vacunas a subunidad
presenta grandes beneficios frente a las vacunas convencionales, sobre todo en
el marco de la seguridad y del manejo racional de epitopes. Sin embargo, este
tipo de vacunas, en general, no producen una eficiente respuesta inmune frente
al agente infeccioso. Para potenciar esta respuesta la estrategia más utilizada
es la producción de inmunógenos de mayor grado de organización estructural, que
derivan en un aumento de la inmunogenicidad. Para tal fin, en trabajos previos,
hemos reportado la utilización de la proteína lumazina sintetasa de Brucella spp. (BLS). BLS presenta una
estructura cuaternaria decamérica de gran resistencia la cual permite insertar
dominios proteicos en sus 10 extremos amino terminales, dando como resultado
proteínas quiméricas con un alto nivel de repetitividad y organización.
Hemos logrado fusionar la proteína VP8* de la
cepa C486 P[1]G6 de rotavirus bovino, a la estructura de BLS, mediante un linker de
glicinas y serinas, generando la proteína de fusión BLS-VP8. La misma resultó
altamente inmunogénica y fue capaz inducir protección frente al desafío con
virus infeccioso en el modelo experimental de ratón lactante.
El objetivo de este trabajo es la obtención de proteínas quiméricas
múltiples, uniendo a la estructura de BLS las proteínas VP8* de las principales
cepas circulantes en el país: C486 P[1]G6, Indiana P[5]G6 y B223 P[11]G6, mediante
la utilización de péptidos heterodiméricos Leu1 y Leu2. Estos péptidos
presentan la particularidad de no poseer estructura en estado monomérico, pero
en estado heterodimérico adoptan una estructura alfa hélice estable, lo cual
posibilita su utilización como nexo entre la estructura de BLS, portadora del
péptido Leu1 y cualquier proteína que contenga el péptido Leu2. De esta manera
se pueden generar quimeras múltiples de BLS, adicionando distintas proteínas
que contengan el péptido Leu2 a la misma estructura decamérica de BLS Leu1. La
finalidad de este trabajo es evaluar tanto la capacidad de BLS como carrier de diversos antígenos así como
también la posibilidad de generar una vacuna a subunidad polivalente frente a
la infección por rotavirus bovino.
Inicialmente, se obtuvo la proteína VP8 Leu2.
Con el fin de estudiar la estabilidad y funcionalidad de la proteína quimérica,
se generó una quimera formada por las proteínas VP8* Leu2 y GFP Leu2 y BLS
Leu1. Se incubaron células Hela con dicha proteína quimérica y luego se observó
señal fluorescente sobre la superficie de las células debido a la propiedad de
la proteína VP8* de unirse al ácido siálico presente en las membranas
celulares. Este resultado sugiere que la proteína de fusión resultante es
estable y que tanto VP8* como GFP mantienen su estructura y función
característica formando parte de la misma.
Con el objetivo de evaluar la inmunogenicidad de la quimera, se fusionó VP8*
Leu2 a BLS Leu1.Se inmunizaron ratones Balb/c adultos con 0,75 mg de VP8* (cepa C486). El suero de dichos
ratones fue analizado por ELISA y seroneutralización. El título de anticuerpos
obtenido por ELISA fue similar al obtenido previamente con las dosis de 0,75 mg VP8* pero fusionado a BLS mediante el linker de glicinas y serinas. Se observó
que los sueros fueron capaces de neutralizar a la cepa homóloga, C486, pero no
a las heterólogas: Indiana y B223.
Estos resultados demuestran que VP8* conserva su inmunogenicidad unida a
BLS Leu1 y que es posible la utilización de ésta para la generación de vacunas polivalentes.