IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La afinidad y la estabilidad viene escrita en las líneas germinales de los anticuerpos: estudios biofísicos de dos Fvs de IgMs de respuesta primaria anti-proteína
Autor/es:
VILLORDO, S; CAUERFF, A
Lugar:
La Plata, Pcia de Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. 6-8 de diciembre de 2008.; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
<!--
/* Style Definitions */
p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal
{mso-style-parent:"";
margin:0cm;
margin-bottom:.0001pt;
mso-pagination:widow-orphan;
font-size:12.0pt;
font-family:"Times New Roman";
mso-fareast-font-family:"Times New Roman";
mso-ansi-language:ES;
mso-fareast-language:ES;}
@page Section1
{size:595.3pt 841.9pt;
margin:3.0cm 3.0cm 3.0cm 3.0cm;
mso-header-margin:35.45pt;
mso-footer-margin:35.45pt;
mso-paper-source:0;}
div.Section1
{page:Section1;}
-->
El
objetivo de este trabajo fue estudiar la estabilidad y la afinidad de los Fvs
de IgMs Moi244 e IgM Moi2alfa dirigidos
contra el Ag lisozima de pollo y compararlos con aquellos obtenidos en
respuesta secundaria de isotipo IgG. Ambos anticuerpos son codificados por
líneas germinales con muy pocas mutaciones. La región que reconoce al antígeno
se denomina Fv o fracción variable y está formada por dos cadenas: pesada o VH
y liviana o VL.
Para
ello se clonaron y expresaron ambas cadenas del Fv por separado en un sistema de
expresión heteróloga. Mediante dicroísmo circular (CD) se realizó el control de
calidad de plegamiento y dichos espectros se utilizaron para calcular la
proporción de estructuras secundaria con el programa CDPro. Ambos Fvs
presentaron espectros característicos de Acs con alta proporción de hoja
plegada beta. La estabilidad térmica de los Fvs fue estudiada mediante CD y DLS. Ambos Fvs presentaron gran estabilidad y una
semejante cinética de desnaturalización usando ambas técnicas, con valores de
Tm aparente que fueron superiores a los 60°C. El Fv Moi 244 posee un Tm
ligeramente superior al Fv Moi2alfa, correlacionándose con una mayor proporción
de estructura beta. Estos valores son superiores a los encontrados para Fvs de
respuesta secundaria de isotipo IgG.
Las
constantes cinéticas de unión (kass y
kdiss) fueron determinadas mediante
la utilización de un biosensor con espejos resonantes, y con ellas se calculó
la constante de afinidad (Ka) para ambos Acs siendo (1,37 ± 0,262) x 106 M-1 para Moi244 y (8,15 ± 1,616)
x 105 M-1 para Moi2alfa. En cambio, usando IgMs
monoméricas obtuvimos valores de 7,31 x 106
M-1para Moi244 y de 4,81 x 106M-1 para
Moi2alfa, manteniéndose la misma relación de afinidades. Como conclusión se puede inferir que los Fvs
de IgM en la respuesta primaria pueden ser igual o más estables que los de IgG y
que además la afinidad alcanzada por los Acs de dicha respuesta anti-proteína
es similar en algunos casos a la de los Acs de respuesta secundaria. Ambos hechos dependen de la línea germinal que
codifica las regiones VH y VL del dominio Fv y de la
interacción entre estas dos regiones.