IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La afinidad y la estabilidad viene escrita en las líneas germinales de los anticuerpos: estudios biofísicos de dos Fvs de IgMs de respuesta primaria anti-proteína
Autor/es:
VILLORDO, S; CAUERFF, A
Lugar:
La Plata, Pcia de Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica. 6-8 de diciembre de 2008.; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:3.0cm 3.0cm 3.0cm 3.0cm; mso-header-margin:35.45pt; mso-footer-margin:35.45pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> El objetivo de este trabajo fue estudiar la estabilidad y la afinidad de los Fvs de IgMs  Moi244 e IgM Moi2alfa dirigidos contra el Ag lisozima de pollo y compararlos con aquellos obtenidos en respuesta secundaria de isotipo IgG. Ambos anticuerpos son codificados por líneas germinales con muy pocas mutaciones. La región que reconoce al antígeno se denomina Fv o fracción variable y está formada por dos cadenas: pesada o VH y liviana o VL. Para ello se clonaron y expresaron ambas cadenas del Fv por separado en un sistema de expresión heteróloga. Mediante dicroísmo circular (CD) se realizó el control de calidad de plegamiento y dichos espectros se utilizaron para calcular la proporción de estructuras secundaria con el programa CDPro. Ambos Fvs presentaron espectros característicos de Acs con alta proporción de hoja plegada beta. La estabilidad térmica de los Fvs fue estudiada mediante CD y DLS.  Ambos Fvs presentaron gran estabilidad y una semejante cinética de desnaturalización usando ambas técnicas, con valores de Tm aparente que fueron superiores a los 60°C. El Fv Moi 244 posee un Tm ligeramente superior al Fv Moi2alfa, correlacionándose con una mayor proporción de estructura beta. Estos valores son superiores a los encontrados para Fvs de respuesta secundaria de isotipo IgG. Las constantes cinéticas de unión (kass y kdiss) fueron determinadas mediante la utilización de un biosensor con espejos resonantes, y con ellas se calculó la constante de afinidad (Ka) para ambos Acs siendo (1,37 ± 0,262) x 106 M-1 para Moi244 y (8,15 ± 1,616) x 105 M-1 para Moi2alfa. En cambio, usando IgMs monoméricas obtuvimos valores de 7,31 x 106 M-1para Moi244 y de 4,81 x 106M-1 para Moi2alfa, manteniéndose la misma relación de afinidades.  Como conclusión se puede inferir que los Fvs de IgM en la respuesta primaria pueden ser igual o más estables que los de IgG y que además la afinidad alcanzada por los Acs de dicha respuesta anti-proteína es similar en algunos casos a la de los Acs de respuesta secundaria. Ambos  hechos dependen de la línea germinal que codifica las regiones VH y VL del dominio Fv y de la interacción entre estas dos regiones.