CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Las mutaciones producidas durante el proceso de maduración de la afinidad de anticuerpos anti-proteína generalmente se encuentran en las regiones de hipervariabilidad o CDRs y ocasionalmente en las regiones frameworks. Esto implica cambios conformacionales en el paratope, como así también cambios en la estructura cuaternaria y rearreglos en la interfaz VL-VH del Fv. La relación entre la afinidad y estabilidad en el proceso de maduración fue estudiada en un sistema formado por dos anticuerpos relacionados estructuralmente, F10.6.6 y D44.1 que reconocen el mismo epitope sobre la lisozima de pollo (HEL). El Ac F10.6.6 posee una afinidad 700 veces mayor que el D44.1 debido a su mayor superficie de complementariedad a HEL. Mediante comparación estructural, cinética y termodinámica de unión, como así también estudios de estabilidad sobre el Fab y el Fv de ambos anticuerpos, se pudo determinar que el proceso de la afinidad de Acs anti-proteína afectan la forma y el contenido de estructura secundaria del Fv estabilizando la interacción VL-VH. En consecuencia, dicho proceso produce un aumento en la estabilidad del Fv mejorando la unión a su antígeno. Haciendo una disección cinética, termodinámica y de estabilidad como el proceso de maduración de la afinidad actúa en cada cadena en el dominio Fv mediante experimentos de intercambio de cadenas, hemos demostrado que ambas cadenas en el Fv han evolucionado para mejorar la afinidad hacia el antígeno. La maduración de VH mejora la kass y la estabilidad del Fv mientras que la maduración de VL mejora la kdiss y la entalpía pero aumentando a su vez la compensación entrópica. Mediante mutaciones puntuales en residuos que forman parte de la interfaz antígeno-anticuerpo y VL-VH, no se pudo encontrar la presencia de sitios claves aislados que puedan explicar el mejoramiento de la afinidad y la estabilidad demostrando que la maduración de la afinidad fue alcanzada por una contribución sinérgica de todas las mutaciones presentes en el dominio Fv. Por otra parte, experimentos de unión a ANS demostraron que la interacción VL-VH es crucial para el plegamiento correcto y para mantener la estabilidad del dominio Fv siendo dicha interfaz donde la relación afinidad-estabilidad fue mejorada en la maduración de la afinidad.