CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Durante el proceso de diferenciación ocurre un cambio en el patrón de expresión génica, existen genes que se activan y muchos que se silencian. Los C/EBPs son una familia de factores de transcripción que juegan un rol central durante la adipogénesis. En particular C/EBPβ, que posee diferentes isoformas (LAP y LIP) que forman homo y/o hetero dímeros, se relocaliza en áreas de heterocromatina pericentromérica iniciada la diferenciación, colocalizando con HP1α, un factor constitutivo de heterocromatina. Ensayos de GSTpulldown confirman la interacción directa in vitro de los mismos. Debido a que es interesante establecer porque un factor de transcripción se localiza en regiones de baja actividad trascripcional, son objetivos del presente comprobar y caracterizar la interacción C/EBPβ-HP1α, en preadipocitos 3T3L1 y dilucidar su rol funcional. Para estudiar éstas interacciones y su localización en el ambiente celular, se utilizó la técnica de Bimolecular Fluorescente Complementation (BIFC), basada en la complementación de fragmentos de proteínas fluorescentes y la subsecuente aparición de fluorescencia, consecuencia sólo de las interacciones entre las proteínas a las que están fusionados cada uno de éstos fragmentos. Se comprobó que la interacción de HP1α existe con LAP y LIP y ocurre en heterocromatina. Y además que preliminarmente, la zona básica de C/EBPβ y las zonas de cromodomain y hinge de HP1α serían las responsables de la misma. A su vez, empleando técnicas de RNAi, notamos que el silenciamiento de C/EBPβ no modifica la distribución subnuclear de HP1α, pero el silenciamiento de HP1α, si bien no deslocaliza a C/EBPβ, produce una disgregación de los cromocentros. Esto nos sugiere que existe una interacción pero es probable que su funcionalidad, como ha sido reportado para otros factores de trascripción, la encontremos en los genes target de C/EBPβ que deben ser silenciados, reclutando HP1α y produciendo una heterocromatinización local.