Estudio de la homo y heterodimerización de C/EBPβ

LUCIANA PAOLA PRENDES; GRACIELA PIWIEN PILLIPUK

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)- Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2008

SAIC (Sociedad Argentina de Investigación Clínica)

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Los C/EBPs son una familia de factores de transcripción de tipo Basic zipper, que juegan un rol central durante la adipogénesis entre otros procesos de diferenciación. Existen productos alternativos de traducción de C/EBPβ, LAP y LIP, que forman homo y heterodímeros. Los homodímeros de LAP poseen gran capacidad de transactivación, los homodímeros de LIP actúan como “dominantes negativos” mientras que se asume que los heterodímeros LAP-LIP tienen una menor capacidad de transactivación. Además se sabe que la proporción LIP/LAP  en varía en anomalías como el cáncer. Como nada se sabe sobre la regulación de la homo y heterodimerización, ni la distribución subnuclear de los mismos, éste es el objetivo del presente trabajo. El principal problema es la imposibilidad de discriminar entre homo- y heterodímeros ya que los anticuerpos anti-CEBPβ están dirigidos contra el dominio C-terminal que comparten LAP y LIP. Para resolver este problema y para estudiar éstas interacciones en el ambiente celular, se utilizó la técnica de Bimolecular Fluorescente Complementation (BIFC) en preadipocitos 3T3L1. Ésta técnica se basa en la complementación de fragmentos de proteínas fluorescentes y la subsecuente aparición de fluorescencia, consecuencia sólo de las interacciones entre las proteínas a las que están fusionados cada uno de estos fragmentos. Como resultado, los homodímeros de LIP se localizan en áreas heterocromáticas mientras que los homodímeros LAP/LAP al igual que los heterodímeros LAP/LIP se ubican no sólo en heterocromatina sino también en áreas eucromáticas. Esto significaría que hay regiones presentes en LAP necesarias para su ubicación eucromática. Por otro lado, tanto la deleción LIPΔZIP  (que carece de la región de dimerización) vista por Inmunofluorescencia y los homodímeros bZIP (que carecen del dominio de transactivación), se encuentran en heterocromatina, sugiriendo que ni la dimerización ni la región de transactivación son necesarias para esta ubicación.