Estudios sobre el rol de proteínas con dominios RING en la degradación de PFT1

SABRINA IÑIGO, PABLO CERDÁN

Rosario, Santa Fé, Argentina

Congreso; XII Reunión Latinoamericana, XXVII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2008

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

ESTUDIOS SOBRE EL ROL DE PROTEINAS CON DOMINIOS RING EN LA DEGRADACION DE PFT1 Sabrina Iñigo, Pablo D. Cerdán            Sabrina Iñigo, Pablo D. Cerdán            Laboratorio de Biología Molecular de Plantas, Fundación Instituto Leloir. Av. Patricias Argentinas 435 (C1405BWE), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. sinigo@leloir.org.ar Existen diversos factores endógenos y ambientales que aseguran que el desarrollo reproductivo ocurra en la estación y en el momento favorable. La luz y la temperatura son factores ambientales esenciales que permiten que las plantas determinen el momento adecuado para la floración.  Nuestro objetivo es comprender cómo actúa bioquímicamente PFT1 (PHYTOCHROME AND FLOWERING TIME 1). PFT1 regula la floración en respuesta a distintas calidades de luz percibidas por los fitocromos, es una proteína nuclear con un dominio C-terminal rico en glutaminas y forma parte del complejo MEDIATOR de Arabidopsis thaliana. Para comprender la función y la dinámica de esta proteína, realizamos mediciones del nivel de PFT1 en distintas condiciones de luz, temperatura y fotoperíodo. Nuestros resultados muestran que el nivel de proteína no varía significativamente en ninguna de estas condiciones. Además realizamos una cinética de degradación utilizando inhibidores de la síntesis proteica y generamos líneas transgénicas inducibles por glucocorticoides que permitirían determinar si la degradación es nuclear o citoplasmática. Existen diversos factores endógenos y ambientales que aseguran que el desarrollo reproductivo ocurra en la estación y en el momento favorable. La luz y la temperatura son factores ambientales esenciales que permiten que las plantas determinen el momento adecuado para la floración.  Nuestro objetivo es comprender cómo actúa bioquímicamente PFT1 (PHYTOCHROME AND FLOWERING TIME 1). PFT1 regula la floración en respuesta a distintas calidades de luz percibidas por los fitocromos, es una proteína nuclear con un dominio C-terminal rico en glutaminas y forma parte del complejo MEDIATOR de Arabidopsis thaliana. Para comprender la función y la dinámica de esta proteína, realizamos mediciones del nivel de PFT1 en distintas condiciones de luz, temperatura y fotoperíodo. Nuestros resultados muestran que el nivel de proteína no varía significativamente en ninguna de estas condiciones. Además realizamos una cinética de degradación utilizando inhibidores de la síntesis proteica y generamos líneas transgénicas inducibles por glucocorticoides que permitirían determinar si la degradación es nuclear o citoplasmática. En nuestro laboratorio se realizaron ensayos de doble híbrido con la porción N-terminal de PFT1 que contiene el dominio vWFA que media interacciones proteína proteína. De estos experimentos se aislaron 2 proteínas que interactúan con PFT1 y que poseen dominios Ring-H2 Finger. Como muchas proteínas que contienen estos dominios están involucradas en la degradación de proteínas por E3 ubiquitin ligasa, generamos las líneas transgénicas mutantes para estos dos genes y que presentan la fusión PFT1:TAP y determinamos que están involucradas en la degradación de PFT1. Realizamos ensayos con extractos in vitro agregando ATP que mostraron una rápida degradación de la proteína. Debido a estos resultados utilizamos inhibidores de proteasoma y demostramos que la degradación ocurre por esta via.