La proteína NS3 del virus del dengue desempeña un rol esencial en la producción de partículas virales infectivas

LEOPOLDO G. GEBHARD; N.GABRIEL IGLESIAS; LAURA A. BYK; FEDERICO A. DE MAIO; ANDREA V. GAMARNIK

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XI CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La proteína no estructural 3 (NS3) del virus del dengue (DENV) es una proteína multifuncional (69 kDa) que contiene las actividades de serin-proteasa, ARN-helicasa y NTPasa. Estas actividades enzimáticas son esenciales para la replicación viral. Su dominio de proteasa (residuos 1 al 169) escinde la poliproteína viral en múltiples sitios. Su dominio helicasa/NTPasa (residuos 179 al 618) asiste a la ARN-polimerasa viral en la síntesis y amplificación del genoma viral. Estos dominios funcionales y estructurales están unidos a través de una región interdominio de 9 residuos de aminoácidos. Además, se ha implicado al dominio helicasa de la NS3 del virus de la fiebre amarilla (YFV) en desempeñar un papel en el ensamblado de las partículas virales, aunque su función en este proceso es hasta ahora desconocida.Para determinar el papel de la NS3 del DENV en la formación de las partículas virales, se utilizó genética inversa para llevar a cabo una mutagénesis de barrido por alaninas en la secuencia de la NS3 de un clon infeccioso del DENV. Para este estudio también se utilizó un virus monocistrónico reportero que expresa luciferasa. Teniendo en cuenta la estructura cristalográfica conocida de la NS3, se obtuvieron 30 mutantes del DENV con cambios en residuos superficiales situados en los dominios de proteasa, helicasa, y la región interdominio. De acuerdo a los niveles de expresión del gen de luciferasa en células transfectadas con el virus reportero, algunos mutantes mostraron defectos moderados o severos en la replicación viral. Otros mutantes fueron capaces de replicarse y producir virus infecciosos tan eficientemente como el virus original. Notablemente, ciertos mutantes replicaron de manera eficiente, con niveles de expresión de proteínas y ARN virales similares al virus original, pero tuvieron graves defectos e incluso impedimentos en la producción de partículas infectivas. De esta manera se identificaron ciertos residuos situados en los dominios de proteasa, helicasa y la región interdominio de la NS3 que son esenciales para el ensamblaje del virión y, consecuentemente, para la producción de partículas infecciosas del DENV tanto en células de mamífero como de mosquito.En este trabajo se estableció que el ensamblado del virus del dengue y la producción de partículas infecciosas son procesos sensibles a mutaciones puntuales en residuos superficiales que no afectan las actividades enzimáticas de la proteína NS3 y que los dominios de proteasa, helicasa y la región interdominio de la NS3 están involucrados en estos procesos.