Expresión diferencial en Fibrosis Quística de una nueva proteína nuclear de localización mitocondrial denominada CISD1

TAMINELLI GL; VALDIVIESO AG; SANTA COLOMA TA

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2007

SAIC

Hemos caracterizado parcialmente y analizado los niveles de expresión de un gen dependiente del canal de cloruro CFTR,  denominado CISD1, el cuál codifica una proteína de función desconocida. Recientemente se ha reportado que posee un dominio de unión a hierro (S.E. Wiley y col, 2007). La secuencia proteica predicha tiene un motivo de translocación mitocondrial y un motivo similar a ND2, una subunidad del Complejo I mitocondrial. La predicción de la localización subcelular de la proteína fue realizada mediante el programa PSORT II (http: //psort.nibb.ac.jp/form2.html). Transfectando células CFDE con una quimera de la proteína CISD1 unida a EGFP y comparando dichas células con y sin tratamiento con TMRM (marcador mitocondrial), hemos comprobado en imágenes obtenidas por microscopía confocal que la predicción de su localización es correcta. El ARNm de CISD1 está modulado negativamente en células CFDE y los niveles son restaurados en células CFDE que expresan ectópicamente el CFTR wt (células CFDE/6RepCFTR). Los resultados fueron confirmados mediante FISH Confocal, hibridización in situ en cortes de tejidos de pulmón, RT-PCRs semi-cuantitavias y RT-PCR en tiempo real de RNA proveniente de células CFDE y CFDE/6RepCFTR. El tratamiento con glibenclamida (50 mM) en las CFDE/6RepCFTR, produjo una reducción en los niveles del ARNm de CISD1. Actualmente realizamos experimentos con un inhibidor más específico del canal de cloruro CFTR(inh)-172 y con RNA de interferencia expresado en pSilencer 1.0-U6 (Ambion Inc. Austin, TX) diseñado específicamente contra CFTR. Conclusiones: Los resultados obtenidos sugieren que CISD1 tendría una localización mitocondrial, una probable función en el Complejo I de la cadena respiratoria y que su expresión se encontraría disminuida en FQ, como ocurre con la actividad del Complejo I mitocondrial (ver resumen de Valdivieso y col). Agradecimientos: Universidad de Buenos Aires (subsidio X156) y ANPCyT (sub. PICT 13907).