Identificacion Molecular de cepas de Saccharomyces cerevisiae aisladas de uvas bonarda, empleando analisis de RFLP de la región ITS

FABANI MP, TORO ME CASTRO O WUNDERLIN DA

Buenos Aires Argentina

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiologia General; 2007

Sociedad Argentina de Microbiología Genral SAMIGE

Identificación Moleculardecepas de Saccharomyces cerevisiae aisladas de uvas Bonarda, empleando análisis de RFLP de la región ITS Fabani, MP; Toro ME, Castro o, Wunderlin,  DA Vazquez F Universidad Nacional de SanJuan; I Instituto de Biotecnología . AV San Martin 1109(Oeste) 5400 UniversidadnAcional de Córdoba-CONICET. Facultad  de Ciencias Químicas, Depto de Bioquimica Clinica-CIBICI Ciudad Universitaria 5000 Fundacion Instituo Leloir. AV Patricias Argentinas 435 Ciudad de Buenos Aires. En los últimos años, los método de genética molecular  han cobrado relevancia  en la identificación y carcaterización de  levaduras relacionadas con la industria vitivinicola comparado con los métodos tradicionales  basado en la características morfológicas y fisiológicas . Este interés  se debe a que estas están fuertemente influenciadas  por las condiciones de cultivo , pudiendo dar resultados inciertos. Además  se necesitan 50-100 ensayos para tener una identificación adecuad. Las técnica de Biología Molecular son de ejecución sencilla, con tiempo de realización relativamente cortoy poseen una alta reproducibilidad, independientemente del estado fisiológico del cultivo.El objetivo de trabajo fue confirmar mediante técnica moleculaares de RFLP, en la region 5.8S-ITS, 6 aislamiento del varietal Bonarda  que habían sido identificados previamente  por métodos bioquímicos  como Saccharomyces cerevisiae. Se realizó el aislamiento y cuantificación de ADN Total. Posteriormente se analizó los perfiles de restricción (RFLPs) del ADN ribosomal dela región 5.8 S-ITS, la cual se amplificó utilizando los primers ITS1 e ITS4. El ADN amplificado fue digerido sin previa purificacion  con las enzimas HaeIII e HinfI e incubando a 37°C durante toda la noche. También seobtuvieron los perfiles d restricción (RFLPs) del ADN mitocondrial realizando  la digestión con la enzima HinfI e incubando a 37 °C durante 24 horas. Los fragmento de PCRy sus fragmentos de restricción, así como el ADN total digerido, fueron separados en geles de agarosaal 1%y 2% mediate electroforesis.